Técnicas en biología molecular

Question 1

por qué se purifica el DNA?

Answer 1

• detectar y cuantificar
• clonar genes y crear DNA recombinante
• secuenciación

Question 2

por qué se se purifica RNA?

Answer 2

para el análisis de genes que se transcriben

Question 3

Cómo se extraen los plasmidios

Answer 3

por lisis alcalina

Question 4

EDTA

Answer 4

agente quelante que secuestra Mg+2

Question 5

SDS

Answer 5

detergente que rompe membranas y denatura proteínas

Question 6

para qué se utiliza el NaOH?

Answer 6

generar un gradiente de iones

Question 7

fenol

Answer 7

agente corrosivo que denatura proteínas

Question 8

KAc

Answer 8

aumenta la salinidad y precipita proteínas

Question 9

para qué se utliza alcohol?

Answer 9

para precipitar al DNA

Question 10

cómo se extrae el RNA?

Answer 10

método de chomczinsky y Sacchi (extracción ácida)
rompe la célula manteniendo la integridad del RNA

Question 11

de qué maneras se puede secuenciar el DNA?

Answer 11

método químico o enzimático

Question 12

En qué consiste la secuenciación por el método químico?

Answer 12

Se separa la muestra de DNA y se les elimina las bases por separado, y luego se les corta los enlaces fosfodiéster a ambos lados, dejando al fragmento marcado en el fosfato al extremo, hasta producir ~1 corte por hebra, representando las posiciones de cada base

Question 13

En qué consiste la secuenciación por el método enzimático?

Answer 13

Se agregan diferentes dNTPs para marcar fragmentos de DNA en los extremos, uno para cada base.

Question 14

PCR

Answer 14

reacción de polimerasa en cadena, es la amplificación enzimática de una muestra de DNA a traves de la manipulación de la t°

Question 15

En qué consiste un PCR?

Answer 15

El DNA se denatura a altas t°, se hibrida con los partidores específicos y se sintetiza la hebra complementaria

Question 16

Qué se requiere para realizar un PCR?

Answer 16

una molécula molde, primers, dNTPs y una DNA polimerasa termoestable

Question 17

PCR en gradiante

Answer 17

Se optimiza la reacción para establecer una mejor t° de hibridación

Question 18

PCR Hot-start

Answer 18

Se inactiva a la polimerasa a bajas t°, químicamente o con anticuerpos

Question 19

touchdown PCR

Answer 19

Se parte con alta t° de hibridación de partidores, y se va bajando cada ciclo hasta alcanzar la t° óptima

Question 20

RT - PCR

Answer 20

Se parte con mRNA y se utiliza una transcriptasa reversa para fabricar una hebra complementaria de DNA que luego se utiliza

Question 21

PRC anidado

Answer 21

Se utilizan 2 parejas de primers, unos externos y otros internos, es el PCR de un PCR.

Question 22

PCR con adición de adaptadores

Answer 22

se añaden adaptadores a los extremos de una muestra de secuencia desconocida

Question 23

PCR inverso

Answer 23

Solo se conoce una secuencia específica de la muestra, que se corta y se pega de manera que las partes conocidas queden en los extremos

Question 24

PCR en tiempo real

Answer 24

se monitorea con fluorescencia cada ciclo de amplificación en un termociclador que detecta fluorescencia

Question 25

Qué tipo de PCR se utiliza cuando se tiene primers desconocidos?

Answer 25

PCR en gradiante

Question 26

Qué tipo de PCR se utiliza para evitar productos inespecíficos?

Answer 26

PCR hot start

Question 27

Qué tipo de PCR se utiliza cuando los partidores fueron diseñados a partir de proteínas o para otra especie?

Answer 27

PCR touchdown

Question 28

Qué tipo de PCR se utiliza cuando se quiere eliminar inhibidores dela muestra?

Answer 28

PCR anidado

Question 29

Qué tipo de PCR se utiliza cuando solo se conoce una región pequeña de la secuendia de la muestra molde?

Answer 29

PCR inverso

Question 30

Qué tipo de PCR se utiliza si se requiere más presición?

Answer 30

PCR en tiempo real