Tecnica Histológica Flashcards
¿Qué es la TH?
Conjunto de pasos que tienen la finalidad de hacer una preparación apta para ser visualizada en el microscopio y estudiar sus componentes, ya sea de muestras biológicas animales o vegetales
Pasos de la TH
Toma de Muestra
Fijación Inmediata
Inclusión
Corte
Tinción
Montaje
¿Qué pasos de la TH generalmente los realiza un médico?
Toma de la muestra y fijación
Tipos de Muestra según estado vital
Biopsia y Necropsia
5 Tipos de Biopsia
Punción y Aspiración
Incisión
Excisión
Sacabocado (Trepanación)
Raspado
Importancia de la Fijación
Detiene descomposición y autóliis para mantener la estructura de la muestra sin cambios notables
Fijador más común y su proceso:
Formol 10%
Penetra 1mm cada hora (se debe mantener de 24 a 48h)
2 Maneras de fijar una muestra:
Inmersión y Perfusión
¿Cuánto fijador debe haber según la muestra en INMERSIÓN?
20 veces el Vol. de la muestra
7 Características de un buen fijador:
- Mata c inmedianamente
- Buena penetración
- Buena difusión
- No disuelve
- Endurece ligeramente
- Fácil de manipular
- Barato
Fijadores Oxidantes y Reductores
Oxidantes: Nombres difíciles
Reductores: Formaldehido, glutaraldehido, alcoholes.
Fijadores Gaseosos
Formaldehido, Ácido Ósmico
Fijadores Líquidos*
FORMOL, AA y Alcohol Etílico
Fijadores sólidos
Bicromato de K
Bicloruro de Hg
Se pueden fijar con Alcohol 96% por 15 min
Toma de células
Paso que permite endurecer al tejido para poder cortarlo
Inclusión
La deshidratación consiste en…
Extraer el agua del tejido en concentraciones crecientes de alcohol
(x2) al 70%
(x2) al 96%
(x2) al 99%
La diafanización o aclaramiento consiste en…
Reemplazar el alcohol por un solvente orgánico (como el Xilol) para mezclarse con la parafina
2 baños
La inclusión consiste en…
Poner la muestra aclarada en un casette para que le caiga parafina (medio graso) y formar un bloque
El corte consiste en…
El microtomo corta láminas finas (5-10 micras) y se ponen en baño maría (flotación) para extenderla
La tinción consiste en…
Agregar colorante a la lámina para diferenciar selectivamente sus estructuras
Características de la Hematoxilina
Morado
Es básico (acidofílico)
Características de la Eosina
Rosa
Es ácido (basofílico)
¿Qué estructuras tiñe la Hematoxilina?
Núcleo
RER
Ribosomas
(ADN)
¿Qué estructuras tiñe la Eosina?
Matríz EC
Citoplasma
Gránulos secretores (Enzimas y Hormonas como la Doble P)
¿Qué se necesita hacer para teñir?
Hacer la diafinización inversa y en este caso rehidratamos con cantidades decrecientes de alcohol, para utilizar el colorante a base de agua
¿Qué hacemos después de teñir?
Volvemos a deshidratar en cantidades crecientes de alcohol
¿Cómo se monta la muestra?
Con una gota de adhrente, usualmente resina, se deja secar y está listo para se observado.
Sustancias utilizadas para prefijación y postfijación en TH de ME
Pre: Glutaraldehido 2.5 - 3%
Post: Tetraóxido de Osmio 1%
¿Cómo se monta una muestra para ME?
Se “tiñe” con metales pesados, se incluye en un bloque de resina epóxica y se corta en láminas (50nm) con el ultramicrotomo (diamante)
