Technologies de l'ADN Flashcards
Qu’est-ce qu’une nucléase?
Enzyme qui clive les liens phosphodiesters entre 2 nucléotides d’un ADN double brin
Qu’est-ce qu’une exonucléase?
Exonucléase qui clive à partir d’une extrémité
V ou F: Les exonucléases ne clivent que dans le sens 5’->3’
FAUX
Qu’est-ce que coupe l’endonucléase?
Le milieu de la chaine d’acide nucléique, produisant des fragments
Que sont les endonucléases de restriction?
Endonucléase qui clive en un endroit caractérisé par une séquence de nucléotides spécifique, dite de restriction
Quelles est l’utilité naturelle des enzymes de restriction?
Couper l’ADN étranger (système de défense des bactéries)
Donner des exemples d’enzymes de restriction
- ECOR
- HindIII
- HaeIII
- BamH1
Quel type de séquences reconnaissent les enzymes de restriction?
Séquences palindromiques
Quels types de bouts peuvent laisser les enzymes de restriction?
- bouts francs
- bouts collants
Quel technique permet de faire une analyse de restriction?
électrophorèse sur gel
Comment se fait la séparation sur gel d’agarose?
ADN (-) migre vers la cathode (+)
Quel agent permet la détection sur le gel?
Bromure d’éthydium, fluorescent
Que fait le bromure d’éthidium?
Molécule fluorescente qui s’intercale à l’intérieur de la double hélice
Comment obtient-on un ADN recombinant?
Recombiner les fragments d’ADN par ligase
V ou F: l’efficacité de ligation des bouts francs est plus faible que celle des bouts collants
VRAI (facteur 100)
Pourquoi la ligation est plus efficace pour les bouts collants?
interagissent entre eux, contrairement aux bouts francs qui doivent entrer en collision
Comment peut-on joindre un bout franc avec un bout collant?
- dNTPS pour terminer le bout collant
2. Ajout bout franc + ligase + ATP
Comment peut-on perpétrer et produire l’ADN recombiant?
Cloning: Insérer l’ADN dans un vecteur qui peut se répliquer de façon autonome
Qu’est-ce qu’un plasmide?
Cercle d’ADN bicaténaire qui peut se répliquer de façon autonome
Que doit minimalement contenir un vecteur?
- ORI (origine de réplication)
- gène de sélection
- site de multiclonage
Quelles sont les étapes d’amplification du plasmide
- insérer l’ADN dans le vecteur
- transformation (insérer dans des bactéries)
- amplification
Quelles sont les utilités de l’ADN amplifié? (2)
- préparer une grande quantité de l’insert afin de le séquencer
- produire des protéines recombinantes (GH, insuline)
Qu’est-ce que la transformation?
Introduction d’un plasmide dans une souche de bactérie ou de levure
Quelle est au mieux l’efficacité de transformation?
1/2000
Comment identifier les cellules qui ont reçu le plasmide?
Sélection avec un antibiotique (marqueur de sélection)
Dans quelle section du plasmide est inséré le gène à traduire?
après le promoteur
Quelle protéine permet de reconnaitre en tant réel et in vivo les cellules transformées?
GFP
Que permet d’étudier GFP? (3)
- niveau de transcription
- niveau de traduction
- localisation cellulaire de protéines
- co-localisation cellulaire