Structure des protéines Flashcards
Malditof
Détermination de la masse moléculaire
Hydrolyse acide
> > rupture des liaisons peptidiques, détruit le W
Détermination de la composition en AA
Dosage à la ninhydrine
> > Tous les AA deviennent bleus sauf la proline jaune
Détermination de la composition en AA
DNFB
Libère l’acide aminé en N-ter
Dégradaton d’Edman
> > libère le 1er AA
PITC puis hydrolyse acide
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Séparation des protéines, gel de polyacrylamide, migrent différemment selon la charge du tampon
SDS
Vitesse de migration ne dépend que de…
Détergent anionique, se lie par des intéractions hydrophobes aux protéines (un SDS tous les 2AA)
» Dénaturation mais S–S non touchés
Vitesse de migration ne dépend que de la taille : les + petites le + loin <3
Méthodes électrophorétiques
Gel d’agarose ou de polyacrylamide, ph obligatoirement alcalin (pour que les protéines soient chargées -)
» Migrent d’autant + loin qu’elles sont chargées -
Possibilité d’utiliser ensuite le bleu de Coomassie : critère de pureté
Chromatographie échangeuse de cation
Séparation selon la charge, résine - de carboxyméthyl, les protéines + se fixent quand pH
Chromatographie échangeuse d’anions
Résine + de DEAE
Sépare selon l’ordre décroissant des pI
CES (chromatographie d’exclusion stérique)
Phase stationnaire = polymère poreux
Phase mobile = tampon isocratique
» GROSSES ÉLUÉES EN 1ER
Précipitation sélective
En fonction de la solubilité : celle ci dépend : _ du pH _ de la température _ de la concentration en sels neutres Réversible
Réaction de Biuret
Conditions
Conséquence
milieu alcalin, liaisons peptidiques et Cu2+ deviennent violet (540nm), il faut au moins un tétrapeptide
Peu sensible
Bleu de Coomassie
colorant anionique se fixant sur les trucs basiques
Spectrophotométrie à 280nm
F W I absorbe de la même façon ?
Condition
F absorbe moins que W et Y
La protéine doit être pure
