Southern Blotting

Question 1

Southern Blotting - Função

Answer 1

Verificar se na amostra há ou não presente a sequência de DNA na amostra de DNA analisada

Question 2

Southern Blotting - Quais membrana utilizamos? 2

Answer 2

Nylon

PVDF

Question 3

PVDF - Sigla

Answer 3

Fluoreto de Polivinilideno (Plástico)

Question 4

Membrana de Nitrocelulose - Adendo

Answer 4

Se liga a DNA de fita simples (não DNA duplex).

Question 5

Southern Blotting - Procedimento 9

Answer 5

DNA → fragmentação por enzimas de restrição

Eletroforese

Após → Gel imerso em NaOH 0,5M pH alcalino

Gel → em contato com a membrana (nylon / PVDF)

Bandas de fita simples são transferidas para membrana

Membrana → secagem a vácuo (80° C)

Hibridização

Lavagem

Colocar membrana em contato com Filme Radiográfico

Question 6

Gel imerso em NaOH 0,5M pH alcalino - Objetivo

Answer 6

Quebrar pontes de hidrogênio e desnaturar DNA em fita simples

Question 7

Membrana → secagem a vácuo (80° C)

Answer 7

Fixar DNA

Question 8

Hibridização - Como ocorre? 2

Answer 8

Anelamento → ligação por complementariedade de pares de base)

Com sondas marcadas por compostos fluorescentes

Question 9

Sondas - O que são?

Answer 9

Sequência de DNA complementar ao que você quer encontrar no genoma

Question 10

Lavagem - Objetivo

Answer 10

Retirar qq coisa ligado inespecificamente

Question 11

Colocar membrana em contato com Filme Radiográfico - Objetivo

Answer 11

Onde acender o filme → é queimando → e o filme permite identificar no genoma o local onde está o gene pesquisado