Métodos de Replicação do DNA - Experimento Flashcards
Metthew Meselson & Franklin Stahl (1958) - Experimento 5
E.coli → cultivada durante várias gerações em meio contendo N15 (nitrogênio + pesado), produzindo DNA “pesado”
Por centrifugação → bactérias foram separadas e retiradas do meio.
Bactéria → transferidas para outro meio → com N14 (nitrogênio normal) → e sofreram uma única divisão celular
Após 1ª replicação → o DNA dessas bactérias foi extraído → e sua análise demonstrou que seu DNA apresentava uma densidade intermediária.
Na próxima geração → apareceu DNA leve e DNA intermediário.
DNA Pesado - O que é?
Produção de Bases contendo 15N = DNApesado
Experimento - Em cada uma das situações o DNA foi extraído é analisado com:
Cloreto de Césio
Cloreto de Césio - Função
Permite determinar a densidade das moléculas
De acordo com a densidade → o DNA fica parado em uma determinada altura do tubo: 4
Tempo Zero / Geração G0 → ao fundo → 100% das moléculas com DNA pesado (N15)
Após 20m / Geração G1 → no meio → 100% das moléculas são híbridas (N14+N15)
Após 40m / Geração G2 → no meio → 50% moléculas leves + 50% moléculas pesadas
Após 60m / Geração G3 → acima → 75% moléculas leves + 25% moléculas pesadas
Experimento - Resumo 5
E. coli cultivadas com 15N.
As bactérias produziram bases densas contendo 15N integradas no seu DNA.
Após várias gerações neste meio, as bactérias foram transferidas para um meio com 14N (nitrogênio normal).
Deste meio foram retiradas algumas bactérias Em tempo 0 (geração 0); ao final de 20 min. (ger. 1); ao final de 40 min. (ger. 2); e, ao final de 60 min. (ger. 3).
Em cada uma das situações o DNA foi extraído e analisado (cloreto de césio).
Processo de Replicação Semi-Conservativo - Conclusão
“Meselson e Stahl concluíram que a replicação do duplex DNA envolve a construção nova molécula por separação da fita parental e então adicionando nucleotídeos para formar a fita complementar em cada destes moldes.”
