Seminário ONCO

Question 1

O que é o cancro?

Answer 1

Uma doença, ou conjunto de doenças, genética que resulta de alterações ao nível do DNA.

Question 2

Que tipos de mutações podem ocorrer nas células, para produzir células cancerígenas?

Answer 2

1. Mutações Somáticas - ocorrem no organismo já formado e normalmente no tipo celular, sendo os descendentes não admitem essa mutações (a não ser que a mutação ocorra nos gâmetas, assim será uma mutação somática hereditária).
2. Mutações Germinativas - um ou os dois gâmetas parentais admitem a mutação, logo todas as células do organismo têm a mutação, sendo esta passada aos descendentes (pelo menos 50% admitem mutação).

Question 3

A que se devem as mutações nas células?

Answer 3

Principalmente à incapacidade da célula reparar os danos do seu DNA, produzindo instabilidade genética.

(Também permite diversidade)

Question 4

Quais os pontos principais da tumorogénese?

Answer 4

Sinalização de proliferação prolongada;
Silenciamento de supressores de crescimento;
Imortalidade replicativa;
Angiogénese;
Resistência à morte celular.

Question 5

Que genes estão associados à tumorogénese?

Answer 5

1. Proto oncogenes: ao serem ativados tornam-se oncogenes e levam a uma proliferação anormal das células;
2. Supressores tumorais: controlam o crescimento e proliferação celular - mutações causam proliferação descontrolada (necessários 2 alelos mutados)
   • Gatekeepers - regulam o crescimento celular por paragem do ciclo ou indução da apoptose (TP53)
   • Caretakers - reparam o DNA, mas estando mutados levam a instabilidade genética (BRCA1)

Question 6

Quais as caraterísticas etiológicas do cancro?

Answer 6

1. Esporádico (70% a 80%)
2. Familiar (15% a 20%)
3. Hereditário (5% a 10%)

Question 7

Quais as caraterísticas do cancro esporádico?

Answer 7

1. Sem história familiar da doença
2. Idade de diagnóstico esperada
3. ‘Acontece por acaso’

Question 8

Quais as caraterísticas do cancro familiar?

Answer 8

1. Múltiplos familiares afetados com vários cancros
2. Idade de diagnóstico esperada
3. Processo de transmissão indefinido (pode dever-se ao mesmo fator de risco)

Question 9

Quais as caraterísticas do cancro hereditário?

Answer 9

1. Apresentação precoce da doença
2. Vários casos de cancro na família
3. Diversos tipos de tumores primários num indivíduo
4. Neoplasias caraterísticas de síndromes

Question 10

O que acontece na transmissão autossómica dominante com penetrância incompleta?

Answer 10

Ocorrem saltos geracionais e alguns indivíduos herdam genes alterados, mas não o cancro.

Question 11

Quais os genes supressores ou de reparação genética que são alterados no Síndrome de Lynch?

Answer 11

MLH1, MSH2, MSH6 e PMS2.

Question 12

Qual a função dos genes MSH e MLH/PMS?

Answer 12

Os MSH2 e 6 reconhecem os erros no DNA (substituição, deleção e inserção).

Os MLH e PMS2 corrigem os erros.

Question 13

Que caraterísticas tem a Síndrome de Lynch?

Answer 13

Autossómica dominante com elevada penetrância;
Germinativa;
Mutações em genes associados à reparação do tipo Mismatch;
Desenvolvimento precoce de cancro de colorretal e incidência aumentada de outras neoplasias como endométrio, intestino, estômago, ovários…

Question 14

Quais os genes mais mutados na Síndrome de Lynch?

Answer 14

MSH2 em 50% dos indivíduos e MLH1 em 30% a 40%

Question 15

Com que métodos podemos rastrear o Síndrome de Lynch?

Answer 15

Imunohistoquímica (análise de perda de expressão proteica) e Identificação de instabilidade por microssatélite (IMS)

Question 16

Apenas existe potencialidade para cancro, se as mutações ocorrerem no gene MSH2?

Answer 16

Não. Deleções na zona EPCAM (promotor de MSH2), leva a que não haja um mRNA funcional, pois o transcrito não é produzido devido à falta de promoção da transcrição.

Question 17

Quais as guidelines para estudar a propensão genética dum indivíduo ter Síndrome de Lynch?

Answer 17

Tem-se os critérios de Amesterdão mais restritos:

1. 3 ou mais indivíduos parentes (de 1º grau) devem admitir cancro confirmado histologicamente;
2. 2 ou mais gerações devem ser afetadas;
3. Um parente deve ser diagnosticado antes dos 50 anos.

Tem-se Guidelines Bethesda revistos:
1. Basta um dos critérios se verificar, sendo esses os graus de parentesco podem ser de 2º ou 3º, não importa a idade do diagnóstico do tumor e este pode ser dos tipos relacionados com colorretal.

Question 18

Qual a principal estratégia de diagnóstico de Síndrome de Lynch?

Answer 18

1. Análise dos critérios de Amesterdão (se forem válidos, pode-se passar para a análise genética)
2. Análise dos critérios de Bethesda (se não forem válidos não vale a pena testar geneticamente)
   
   2. a. Seguir para IHQ/MSI
   3. b. Se o anterior for positivo, então testar geneticamente.

Question 19

Qual a importância do diagnóstico pré-assintomático?

Answer 19

Identificar portadores de mutações e conduzi-los para programas de rastreio ou profilaxia adequados (colonoscopia a cada 1-2 anos depois dos 20 anos ou mais espaçado e antes dos 20 anos, caso o diagnóstico mais recente seja de alguém muito mais novo - polipectomia no caso de ser adenoma ou colectomia segmentar se for adenocarcinoma no cancro colorretal).

Question 20

O que é o CMMRD?

Answer 20

É síndrome rara de predisposição hereditária para crianças ou jovens adultos com um espetro alargado de neoplasias (deve-se a um indivíduo ter mutações nos 2 alelos provenientes dos pais com LS).

O principal sintoma é aparecimento de manchas café com leite.

Question 21

Como se pesquisam as variantes dos genes MMR?

Answer 21

Por NGS que inclui um painel de 113 genes (é capaz de identificar variantes pontuais, muito comum no gene MSH2, e rearranjos exónicos, muito comum no gene PMS2).

Question 22

Quais as etapas de NGS?

Answer 22

1. Preparação da biblioteca (fragmentação do DNA e ligação a adaptadores)
2. Formação dos clusters
3. Sequenciação (amplificação paralela de DNA - PCR)
4. Análise de dados (alinhamento das reads do genoma de referência)

Question 23

Que tipo de classificação pode ser dada às variantes génicas?

Answer 23

1. Patogénica - acionar métodos clínicos preventivos
2. Potencialmente patogénica - a.m.c.p.
3. Variante de significado incerto
4. Potencialmente benigna - sem intervenção clínica
5. Benigna - sem intervenção clínica

Question 24

Qual a etiologia do cancro mamário?

E do ovário?

Answer 24

70% a 80% é esporádico e 5% a 10% é hereditário.

75% a 90% é esporádico e 10% a 25% é hereditário.

Question 25

Quais as caraterísticas do cancro hereditário da mama e ovários?

Answer 25

Trata-se dum síndrome - HBOC e é uma doença autossómica dominante com penetrância incompleta associada a mutações na linha germinativa dos genes BRCA 1 e 2.
Estes genes relacionam-se com a reparação dos danos no DNA e admitem caraterísticas de genes supressores tumorais (caretakers), mantendo a estabilidade genética.

Question 26

Quando deve ser dado aconselhamento genético relativamente ao cancro mamário/do ovário?

Answer 26

1. Pessoas com históricos de família onde os cancros da mama, ovário e próstata já tenham sido diagnosticados;
2. Diagnóstico do cancro da mama antes dos 50 anos;
3. Diagnóstico de TNBC antes dos 60 anos;
4. Histórico pessoal de cancro do ovário ou mamário (feminino ou masculino).

Se o indivíduo estiver integrado nestes critérios será calculado o risco de predisposição (BRCAPRO) e caso este dê superior a 10%, testes genéticos devem ser efetuados para as mutações BRCA1/BRCA2.

Question 27

Qual a mutação de novo já estabelecida nas famílias portuguesas relativamente ao HBOC?

Answer 27

Mutação no codão Alu no gene de BRCA2 - mutação fundadora e do tipo de deleção.

Question 28

Que ações devem ser tomadas segundo os critérios que foram validados (HBOC) e as novas mutações fundadoras das famílias portuguesas?

Answer 28

1. Testagem a mutações fundadoras positiva - intervenções clínicas segundo as recomendações para a síndrome HBOC;
2. Critério BRCAPRO < 10% e testagem negativa - monitorização própria e de familiares segundo o histórico;
3. Critério BRCAPRO > 10% e testagem negativa - análise dos genes BRCA1/BRCA2.

Question 29

Qual o tipo de terapia normalmente usada em cancros derivados de mutações BRCA1 e 2?

Answer 29

Usa-se inibidores PARP (olaparib e talazoparib) que vão anular a reparação do DNA e desta forma levar a que a célula entre em apoptose, tratando-se duma morte sintética. Pode ser usado tanto em mutações da linha germinativa como somáticas.

Question 30

Quais as principais desvantagens de usar FFPE na análise de tumores?

Answer 30

1. Baixa qualidade e material muito fragmentado
2. Amostras heterogéneas (células tumorais e normais)
3. O DNA das amostras pode conter artefactos de alterações genéticas;
4. Deteção pouco precisa por NGS.

Question 31

Descreva quais as variantes maioritárias das famílias com HBOC e do gene BRCA1.

Answer 31

BRCA2 c.156_157insAlu + BRCA1 c.3331_3334del + BRCA1 c.2037delinCC representam 52% das variantes patogénicas dos genes BRCA1/BRCA2 nas famílias com HBOC;

BRCA1 c.3331_3334del + BRCA1 c.2037delinCC representam 73% das variantes de linha germinativa do gene BRCA1

Question 32

Quais os biomarcadores que podem prever alguma sensibilidade à terapia por PARPi?

Answer 32

1. Metilação dos genes de HR (recombinação homóloga);
2. Mutações somáticas ou germinativas nos genes de HR.

Analisados por Genomic scar assays e functional assay.

Question 33

Em que gene de HR ocorrem as principais mutações (somáticas ou linha germinativa) no caso de cancro dos ovários?

Answer 33

BRCA1 (54%)