semaine 4

Question 1

Décrire le principe de salting out

Answer 1

Les protéines restent en solution via l’interaction du solvant et de ses portions hydrophiles
L’addition de sel perturbe l’équilibre solvant-protéines solvatées et les molécules d’eau se lient au sel au lieu des protéines. En absence de ces molécules d’eau stabilisantes, les protéines interagissent entres elles et précipitent

Question 2

Donne les anions et cations en ordre décroissants de leur abilité à faire précipité

Answer 2

anions: PO4>SO4>CH3COO>CL>Br>CLO4>SCN
cations: NH4>Rb>K>Na>Li>Mg>Ca>Ba

Question 3

Quels sont les avantages à utiliser le sulfate d’ammonium pour le salting out?

Answer 3

À saturation on obtient une forte molarité et une faible densité
Dégage très peu de chaleur lors de sa dissolution

Question 4

Vrai ou faux
le salting out est une première étape très utile dans un protocole de purification

Answer 4

Vrai

Question 5

Vrai ou faux
Lors du salting out la qualité de l’extrait et le type de tampon utilisé sont très important

Answer 5

Faux

Question 6

Quel est le facteur d’enrichissement pour le salting out? son taux de rendement?

Answer 6

3-5
70%

Question 7

Vrai ou faux
Le culot de protéine créer par salting out est peu stable

Answer 7

Faux très

Question 8

Quelles sont les conditions de fractionnement?

Answer 8

-[protéines] = 5-30 mg/ml
Faible agitation à 0C
Ajouter sel lentement
Période de repos
Centrifugation à 0C
Culot drainé et dialysé

Question 9

Vrai ou faux
Souvent une différence de 10% de saturation permet de précipité >90% des prots

Answer 9

Vrai

Question 10

Nomme un problème d’ajouter le sulfate d’ammonuim sous forme liquide au lieu de solide

Answer 10

augmentation de volume problématique pour les étapes de centrifugation

Question 11

Vrai ou faux
Une seule méthode de chromatographie est nécessaire pour purifier une prot

Answer 11

Faux, combinaison de méthode

Question 12

Quels sont les 4 grands types de chromatographie?

Answer 12

-échangeur d’ions
- Tamisage moléculaire
- Hydrophobicité
-Affinité

Question 13

Quelle propriété des prots aide à déterminer le type d’échangeur à utiliser lors d’une chromato sur colonne échangeuse d’ions?

Answer 13

Le pI

Question 14

De quoi dépend la force de l’interaction sur un échangeur d’ions?

Answer 14

force ionique et température (+ à basses température et faible force ionique)

Question 15

Comment les protéines sont élués llors d’une chromato sur échangeur d’ions?

Answer 15

Élués et fractionnées en appliquant un gradient croissant de sel

Question 16

Comment fonctionne la chromato par tamisage moléculaire?

Answer 16

Selon la taille

Question 17

Quel information supplémentaire nous donne le tamisage moléculaire?

Answer 17

La taille de la prot

Question 18

Quel information supplémentaire nous donne le tamisage moléculaire?

Answer 18

La taille de la prot
Si une protéine existe sous forme de monomère ou dimère

Question 19

Comment fonctionne la chromato par hydrophobicité?

Answer 19

Faire interagir les régions hydrophobes des protéines avec un adsorbant hydrophobe

Question 20

Vrai ou faux
la température et la force ionique influence la chromato hydrophobicité de manière similaire à la chromato par échange ionique

Answer 20

Faux, de façon contraire

Question 21

L’élution et le fractionnement des prots lors d’une chromato d’hydrophobicité se fait en appliquant un gradient _____ de sel

Answer 21

décroissant

Question 22

Comment fonctionne la chromato par affinité?

Answer 22

utilise les interactions spécifiques et réversibles entre une protéine et un ligand

Question 23

Comment fonctionne la chromato IMAC?

Answer 23

adsorption en présence de faibles concentrations d’imidazole
Élution à fortes concentrations d’imidazole

Question 24

La chromato IMAC se fait avec des prots natives ou dénaturées?

Answer 24

Les deux

Question 25

Décrire un protocole typique de purification d’une protéine sur Ni-NTA agarose

Answer 25

-L’échantillon contenant la protéine d’intérêt est ajouté à la résine et mélanger par inversion durant 1h à 4C
-La suspension est placée dans une colonne puis la sédimentation se fait par gravité
-on lave avec des concentration plus grandes d’imidazole
- On élue la protéine d’intérêt avec une haute concentration d’imidazole
-On analyse les différentes fractions sur SDS-PAGE

Question 26

Quels sont les paramètres à considérer lors de la préparation de colonnes à chromatographie?

Answer 26

-taille de la colonne
-Dépot
-Élution
-Lavage
-Entreposage