Sécurité en laboratoire et généralités

Question 1

Qu’est-ce qu’un organisme modèle?

Answer 1

Ce sont des espèces étudies de façon systématique et approfondie dans le but de comprendre des processus biologiques fondamentaux.

Question 2

Quel est l’organisme modèle eucaryote privilégié en génétique moléculaire?

Answer 2

La levure Saccharomyces cerevisiae

Question 3

Pourquoi la levure Saccharomyces cerevisiae est utilisée en génétique moléculaire?

Answer 3

• C’est un organisme unicellulaire dont le génome est complètement séquencé
• Il peut être manipulé autant sous forme haploïde que diploïde.
• plusieurs banques génomiques et collection de gènes modifiés sont disponibles

Question 4

Quels sont les principaux avantages d’utiliser un organisme caractérisé génétiquement et physiologiquement en laboratoire?

Answer 4

• Permet d’utiliser des protocoles bien établis

- Facilite l’appropriation de techniques et de connaissances pratiques

Question 5

Qu’est-ce que la mutagenèse expérimentale?

Answer 5

• C’est un outil puissant en génétique moléculaire qui permet de mieux comprendre les fonctions des gènes
• Elle consiste à introduire des modifications dans le génome par le biais d’agents chimique ou physique ou par le biais d’une approche moléculaire.

Question 6

Pourquoi l’utilisation d’organisme modèle est recommander lors de la mutagenèse expérimentale?

Answer 6

• Permet d’avoir un meilleur contrôle du processus de mutagenèse
• Permet de facilité grandement l’étude des mutants qui en résultent

Question 7

Quelles sont les 2 types de contamination en laboratoire?

Answer 7

• Par un simple contact avec un objet non-stérile

- Par déversement d’une culture bactérienne

Question 8

Quels sont les 5 risques ou dangers réels rencontrés dans un laboratoire de microbiologie?

Answer 8

• Le feu
• La radiation
• L’électricité
• Les produits chimiques
• Les substances biologiques

Question 9

Qu’est-ce que la biosécurité ?

Answer 9

C’est la mise en application de connaissances, de techniques et d’équipements afin de prévenir l’exposition des personnes, des laboratoires et de l’environnement aux substances infectieuses ou aux dangers biologiques.

Question 10

Quels sont les exigences pour chaque niveau de confinement de laboratoire?

Answer 10

1 = Aucune exigence spécifique
2 = Utilisation d'appareils de confinement simple
3 = Barrière primaire et secondaires exigées
4 = Unités isolées

Question 11

De quelle façon faut-il évaluer les risques présents au laboratoire?

Answer 11

• Il est important de vérifier tous les caractéristiques des agents pathogènes et des produits chimiques qui seront utilisés lors du laboratoire
• Vérifier également les souches ou lignées cellulaires qui ne présentent pas de risque important normalement

Question 12

Quelles sont les 4 voies d’expositions aux agents pathogènes ? .

Answer 12

1) Inhalation : via les aérosols
2) ingestion : via le pipettage à la bouche, les éclaboussures et contamination cutanée.
3) Injection: via des aiguilles, des seringues, des morsures et égratignures
4) Contact Direct: via la peau (cutané), via les muqueuses ou les yeux lors d’un déversement ou d’éclaboussure

Question 13

Qu’est-ce qu’un personne doit absolument connaître et avoir pour être admis au laboratoire?

Answer 13

• Les protocoles, les pratiques et les dangers.
• Ils doivent porter l’équipement de sécurité nécessaire.

L’entré au laboratoire est interdit à toutes personnes qui ne respect pas cela.

Question 14

Quels sont les 4 équipements de protection individuelle obligatoire au laboratoire?

Answer 14

• Un sarrau blanc
• Des lunettes de sécurité
• Des pantalons longs
• Des chaussures fermées

Question 15

Quels sont les 3 situations où le port de gants est obligatoire?

Answer 15

• Lorsqu’il y a un risque de contact avec les mains ou lors de manipulation (transfert, pipettage, …) de solutions corrosives ou dangereuses
• Lors de la désinfection d’un déversement d’un liquide contaminé ou de manipulation de contenants et matériels à décontaminer
• Lorsqu’on travail avec du matériel de biologie moléculaire (éviter la contamination par des nucléases et protéases)

Question 16

Quelle est la différence entre décontamination et désinfection?

Answer 16

La décontamination c’est tout processus qui élimine ou tue les MO et la désinfection c’est un moyen physique ou chimique qui tuent les MO.

Question 17

Comment travaillez proprement et de façon sécuritaire avec les MO?

Answer 17

• Désinfectez la surface de travail avant et après
• Demeurez toujours près d’un brûleur lorsqu’il est allumé
• Lavez vos mains au besoin et chaque fois que vous quittez le laboratoire

Question 18

Comment travaillez proprement et de façon sécuritaire avec les produits chimiques?

Answer 18

• porter des gants et des lunettes de sécurité
• nettoyer les surfaces de travail après avoir prélevé ou pesé un produit.
• s’assurez que les contenants sont fermés hermétiquement après usage
• Replacez les produits à leur place aux endroits d’entreposage des produit qui ont été assignés de façon a regrouper les produits selon les normes SIMDUT (limite les risques inhérents aux produits incompatibles)

Question 19

Quels contenants doivent-être utilisés pour la préparation des milieux de culture?

Answer 19

• un bécher ou un erlenmeyer d’une capacité égale a 2 fois le volume total à préparer.
• Le bécher est utiliser lorsqu’un ajustement à l’aide d’un pH mètre est requis.

Question 20

Pourquoi l’utilisation de bouteille en verre est interdit pour la préparation de milieux de culture?

Answer 20

lors de la préparation de milieu de culture, il est souvent essentiel d’utiliser la chaleur afin de faire dissoudre les composants tel que l’agar. Les bouteilles de verre sont très peu résistant à la chaleur de la plaque chauffant et cela risque de la faire éclater.

Question 21

Vrai ou Faux:
L’erlenmeyer utilisé pour la préparation d’un milieu de culture ou la culture de MO peut également être utilisé pour l’entreposage

Answer 21

Faux

Question 22

Quel contenant est utilisé pour l’entreposage?

Answer 22

La bouteille en verre

Question 23

Quel est le délais acceptable pour faire stériliser des milieux ou des solutions dans l’autoclave?

Answer 23

Au plus tard dans les 2 à 3 heures suivant leur préparation.

Question 24

Que doivent comporter les milieux de culture en erlenmeyers après leur stérilisation à l’autoclave?

Answer 24

Une barrière double : un bouchon en mousse et un capuchon en papier (type papier Kraft) ou en aluminium.

Question 25

Qu’est-ce qui est important lors de la préparation de gélose en boite de pétri?

Answer 25

• laissez refroidir les milieux stériliser dans l’erlenmeyer dans un bain à 50°C
• retirer les bulles d’air dans la boite de pétri
• Laisser sécher les géloses fraîchement coulées à température ambiante 36 à 48h afin d’assécher les géloses (humidité optimal et solidification du milieu gélosé)
• Entreposer dans un sac plastique en position inversée

Question 26

Quoi faire avec un surplus d’agar fondu à jeter?

Answer 26

Il est essentiel de le vider dans un sac de plastique avant de le jeter à la poubelle

JAMAIS DANS L’ÉVIER

Question 27

Pourquoi est-il essentiel de rincer à l’eau chaude immédiatement après utilisation le matériel pour la fabrication de milieu de culture contenant de l’agar?

Answer 27

Il est essentiel d’éviter que l’agar se dépose sur les parois du matériel utilisé. L’agar solidifier est très difficile à déloger et nettoyer convenablement. Cela complique le nettoyage et les pipettes deviennent inutilisables.

Question 28

Pourquoi la quantité de bouillon de culture dans un erlenmeyer doit représenter environ le dixième du volume du contenant ?

Answer 28

Car la croissance des MO aérobies et anaérobies facultatives est favorisée par une bonne aération du milieu. En mettant peu de milieu dans un erlenmeyer, on augmente le ratio surface/volume et en agitant fortement, cela favorise l’oxygénation du milieu.

Question 29

Quel est le volume maximal de bouillon a distribuer dans les tubes de culture 16x100 mm et dans les tubes 16x150 mm?

Answer 29

16x100mm = 4 mL

16x150mm = 8 mL

Question 30

Quels sont les 4 grandes étapes pour couler une gélose en boite de pétri?

Answer 30

1) Préparer d’abord la quantité nécessaire du milieu choisi pour les géloses, Idéalement le milieu est préparé dans un erlenmeyer .
2) Stériliser à l’autoclave le milieu dans l’erlenmeyer muni d’un bouchon mousse.
3) À la sortie de l’autoclave, déposer le contenant dans un bain à 50°C pour refroidir le milieu : l’agar ne figera pas à cette température.
4) Couler le milieu dans les boîtes de Pétri

Question 31

Quel est la quantité de milieu gélosé dans une boite de pétri pour la croissance de levure?

Answer 31

25 mL (normalement 15 mL pour les bactéries)

Question 32

Quel méthode de stérilisation doit-on utiliser lorsqu’une solution contient un produit thermolabile et que l’autoclave n’est pas possible?

Answer 32

L’alternative consiste à filtrer la solution à l’aide d’un filtre 0,22 micromètre, qui retient les microorganismes bactériens de la solution

Question 33

Quels sont les 3 principes de bases de transfert aseptique?

Answer 33

1) Ne JAMAIS déposer un bouchon sur la paillasse (peut importe sa taille)
2) Ne JAMAIS avoir 2 contenants (tubes, bouteille, gélose en boite de pétri) en même temps.
3) TOUJOURS ouvrir un contenant (stérile ou avec une culture) un temps minimal permettant de faire le transfert ou un ensemencement.

Question 34

Comment évalue-t-on l’état de la croissance bactérienne?

Answer 34

avec la turbidité de la culture en bouillon. Il est possible de la déterminer avec l’absorbance à 600 nm. (blanc = milieu de culture stérile)

Question 35

Quel cycle utiliser pour un décontamination?

Answer 35

utilisation du cycle liquide de l’autoclave d’une durée de 60 minutes.

Question 36

Vrai ou Faux:

L’utilisation d’eau de javel lors d’une décontamination à l’autoclave favorise une meilleure décontamination?

Answer 36

Faux

Il ne faut jamais utiliser d’eau de javel car celui-ci est corrosif et endommagera l’autoclave.

Question 37

Qu’est-ce qui est essentiel lors de l’utilisation de l’autoclave pour la décontamination?

Answer 37

Il est primordiale d’utiliser un bio-indicateur comme témoin négatif. (bio-indicateur EZ Test)

Question 38

Que faut-il faire avec les bio-indicateur pour s’assurer de la réussite du cycle d’autoclave?

Answer 38

Écrasez l’ampoule et faire une incubation de 24h à 60°C. Incubation du témoin négatif utiliser lors du cycle et d’un témoin positif non traité à l’autoclave.
Le témoin négatif doit être mauve (aucune croissance) et le témoin positif doit être jaune (croissance)

Question 39

Les bio-indicateurs témoins négatif et positif sont jaunes, que dois-je faire?

Answer 39

Cela indique une croissance et donc que la décontamination n’a pas fonctionner. Il faut donc recommencer la décontamination à l’autoclave avec de nouveaux bio-indicateurs.

Question 40

Les bio-indicateurs témoins négatif et positif sont mauves, que dois-je faire?

Answer 40

Cela indique un problème avec les bio-indicateurs puisque le témoin positif n’a pas démonter de croissance. Il faut donc aviser un responsable et recommencer la décontamination à l’autoclave avec de nouveaux lots de bio-indicateurs.

Question 41

Le bio-indicateur témoin négatif est mauve et le témoin positif est jaune, que dois-je faire?

Answer 41

Cela veut dire que la décontamination à été effectuer avec succès et que le matériel peut être disposé adéquatement.