Criblage des mutants Flashcards
Quel approche de criblage de mutant est utilisée?
Par sélection négative avec des réplicas sur géloses (technique du velours)
La perte de capacité à utiliser une source de carbone ou d’énergie peut-être détectée chez un mutant par son incapacité à croitre lorsque cette source est l’unique source de carbone ou d’énergie du milieu.
Dans quel ordre doivent être fait les répliques par velours et pourquoi?
Il est important de répliqué d’abord sur gélose SC-Leu/glycérol et ensuite sur gélose SC-Leu/glucose.
C’est très important de respecté cet ordre afin de ne pas contaminer les sources de carbone. Toutes les souches sont capable d’utiliser le glucose mais pas le glycérol, alors l’inversion pourrait mener a de faux résultats. En plus, comme le but est de trouver des mutants incapable d’utiliser le glycérol, il faut s’assurer que le plus gros innoculum soit déposer sur la gélose la plus “sélective” (ici la source de carbone la plus difficilement métabolisable).
Quel est l’avantage de la technique de velours?
C’est de pouvoir faire rapidement une copie de dizaines ou de centaines de colonies.
Pour la sélection des mutants glycérols potentiels quels seront les colonies choisies ?
- Les colonies qui ont été en mesure de croître sur milieux glucose mais pas sur milieux glycérol.
- Préférablement, des colonies isolées des autres afin de facilité les manipulations et éviter la contamination.
Un témoin positif est important pour la sélection, quel colonie sera utiliser et a quoi ce témoin servira-t-il ?
- Une colonie ayant bien pousser sur les deux milieux servira de témoin positif puisque pour être valide, il devra également croître sur les 2 milieux de sélections.
- Ce témoin est important afin de s’assurer que les milieux sont de bonne qualité pour la croissance des levures et ainsi valider que l’absence de croissance est dû à la mutation et pas aux milieux.
