RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO Flashcards
Quais os 2 compartimentos do retículo?
• Retículo rugoso - domínio responsável pela
síntese proteica ao qual estão associados
ribossomas, que criam características/morfologia
diferente a esta parte do organelo
• Retículo liso - domínio responsável pela formação
de uma vesícula de transporte em direção ao
complexo de Golgi ou pela biossíntese lipídica, não
sendo necessários ribossomas
Quais as diferentes vias do tráfego proteico intracelular? Quais as que dependem de sinalização?
1 - Ribossomas: local de síntese proteica 2 - Citoplasma: local de destino por defeito (As únicas proteínas que não contêm sequência sinal são as transportadas para o citoplasma) Destinos dependentes da sinalização: 3 - endereçamento para a mitocôndria 4 - endereçamento para os cloroplastos 5 - endereçamento para os peroxissomas 6 - endereçamento para o núcleo 7 - via de secreção (ER-Golgilisossoma/membrana/meio extracelular)
Caracterizar a via de secreção.
- É essencial ao funcionamento da célula
- Tudo o que é secretado (anticorpos, hormonas, proteínas da membrana plasmática) utiliza esta via
- 1/3 das proteínas das células são produzidas através desta via
- Constituída pelo retículo endoplasmático, complexo de Golgi, lisossoma e pela membrana plasmática
- Outros organelos com funções importantes: endossoma, peroxissoma, mitocôndria
- Todas as proteínas que seguem esta via nascem no retículo endoplasmático
Onde se encontram as sequencias sinais para cada organelo na proteína, e quais os que removem esta sequência?
Lumen do reticulo endoplasmatico, matriz mitocondrial, cloroplasto - terminal N, removem a sequencia
Peroxissoma - terminal C e N, nao remove a sequencia
Nucleo - varia o terminal, nao remova a sequencia.
Qual o diametro dos varios dominios do reticulo?
60-100 nm.
Constituição do reticulo
Invólucro nuclear - única cisterna tipo folheto a
rodear o núcleo
• Rugoso - biossíntese de proteínas (organização em
folhetos)
• Liso - formação/fusão de vesículas e local de
contacto com outros organelos (estrutura tubular)
Onde se encontra o reticulo rugoso e liso nos neuronios
nos neurónios, o rER encontra-se predominantemente nos corpos celulares e
porção proximal das dendrites, enquanto o sER encontra-se nos axónios e na parte distal das neurites.
Quais as funções do reticulo?
- Ponto de partida para proteínas da via de secreção
- Estabelece a orientação (topologia) das proteínas da membrana
- Adição de percursor de glicosilação
- Biossíntese lipídica (fosfolípidos, colesterol)
- Controlo do armazenamento de Ca2+
- Desintoxicação de moléculas
- Gliconeogénese (contém a glicose-6-fosfátase)
Qual o complexo proteico que constitui o translocao no transporte pós traducional? Qual o complexo que é o recetor membranar que identifica a sequência sinal? Que proteína mantém as proteínas lineares no transporte? Que proteína cliva a sequência sinal no lúmen, após endereçamento? Que proteína assiste no folding adequado da proteína?
O translocão é constituído pelo complexo Sec61
que forma um canal
• O complexo Sec62/63 é o recetor membranar
que identifica a sequência sinal
• HSP70 citosólica - chaperone que mantém as
proteínas lineares
• Após o endereçamento, no lúmen reticular, a
sequência sinal é clivada por uma peptídase
• BiP (existe apenas no lúmen do retículo) -
chaperone que assiste no folding adequado da
proteína
Passos do transporte co-traducional
- Na proteína nascente, ao sair do ribossoma, fica exposta a sequência sinal no N-terminal (extremidade
amina) - A SRP - ribonucleoproteína com tripla função: reconhece a sequência sinal, liga-se ao ribossoma e para
a tradução - reconhece a sequência sinal da proteína nascente - Ao nível da membrana, há um recetor da SRP que se liga ao complexo proteína nascente-SRP que
permite o correto posicionamento do ribossoma para junto do canal (translocão Sec61) - Com o gasto de energia (hidrólise de GTP1), o canal abre-se e a ligação SRP-canal é desfeita →
ribossoma retoma a tradução - À medida que a cadeia polipeptídica elonga, passa pelo canal para o lúmen reticular e a sequência sinal
é clivada pela peptídase e é degradada - A proteína no organelo será, então, mais curta do que a proteína produzida no citoplasma - num
Western Blot, traduz-se em menos cerca de 2kDa do que na proteína produzida no citoplasma
VER FIGURA DA SEBENTA, PAGINA 16
Porque são necessárias chaperones no transporte das proteínas no retículo?
As proteínas só podem atravessar o canal na sua forma linear. Logo, é necessária a ligação de
chaperones (proteínas que ajudam no folding correto da proteína - a aquisição da estrutura terciária/
quaternária ocorre dentro do lúmen do retículo).
Qual a consequência do ambiente citoplasmático ser redutor e a via de secreção ser oxidante?
O citoplasma é um ambiente redutor logo uma proteína citoplasmática não adquire pontes dissulfeto . 2 Toda a via de secreção é um ambiente oxidante (dentro das matrizes dos organelos da via de secreção), logo as proteínas irão estabelecer as pontes dissulfureto.
O que é a PDI?
PDI - enzima que permite as ligações
dissulfureto
Qual o outro fenómeno que acontece à maioria das proteínas que seguem a via de secreção? Quais os seus passos.
Glicosilação.
1. A proteína recebe um oligossacarídeo percursor
(através da via do dolicolfosfato ) num grupo N
de asparaginas , separadas de um aminoácido
por uma serina ou treonina (aminoácidos onde
ocorrem fosforilações)
2. Depois, o oligossacarídeo é modificado com a
adição/remoção de monossacarídeos (pelas
glicosídases) ainda no retículo e, principalmente,
no complexo de Golgi (reação catalisada por
uma oligossacaril-transférase)
O que faz a tunicamicina na glicosilação? E a consequência de uma mutação numa asparagina?
Inibe a glicosilação, por inibição da fosforilação do dolicolfosfato. Problemas na glicosilação.
Características proteínas tipo I
- Atravessam 1 vez a membrana plasmática
- Terminal carboxilo voltado para o citoplasma e terminal amina voltado para o lúmen do ER
- Sequência sinal clivada
Características proteínas tipo II
- Não têm a sequência sinal clivada
* Terminal amina voltado para o citoplasma e terminal carboxilo voltado para o lúmen do ER
Características proteínas tipo III
- Tipologia inversa à do tipo II
* Não têm sequência sinal clivável
Características proteínas tipo IV
- Múltiplos domínios transmembranares
* Terminal carboxilo voltado para o citoplasma e terminal amina voltado para o lúmen do ER
2 sequências internas muito importantes que
determinam a topologia das proteínas membranares
stop-transfer anchor sequences (STA) e signal anchor sequences (SA).
O que determina a orientação dos terminais N e C nas proteínas membranares do retículo?
a densidade de cargas positivas antes ou depois da SA
Formaçao de proteínas tipo I
Neste caso, a proteína segue a via de secreção normal para o interior. Durante o transporte, o domínio transmembranar (sequência STOP de ancoragem) passa para o interior da membrana através de um movimento lateral
A que se deve a orientação inversa dos terminais das proteinas tipo II e III. Formaçao de proteínas tipo II e III
os seus terminais N e C estão voltados são contrários. Isto deve-se ao facto da direção dos aminoácidos com carga positiva ser inversa. • Proteínas do tipo II - sequência sinalizadora ladeada por aminoácidos com carga positiva na direção do terminal N • Proteínas do tipo III - sequência sinalizadora ladeada por aminoácidos com carga positiva na direção do terminal C
Como se formam proteínas tipo IV. Quantos tipos de proteínas tipo IV há. como se sabe quando é uma sequencia tipo STA ou tipo SA.
Apresentam múltiplos domínios transmembranares
com várias sequências STOP de ancoragem (param a
translocação) e sequências start de ancoragem
(induzem a translocação). A ordem relativa pela qual
aparecem na sequência proteica é que define se são
SA ou STA. 5 - I, II, III, IVa e IVb. Junto às SA está uma sequencia positiva (?)
Como se formam proteínas ligadas ao GPI? Qual a sua função?
• Ancoradas à bicamada fosfolipídica por uma molécula
anfipática chamada GPI (glicosilfosfatidilinositol)
• Inicialmente sintetizadas e ancoradas como proteínas
do tipo I
• Contudo, uma pequena sequência de aminoácidos
junto ao domínio transmembranar é reconhecida pela
GPI transamídase que cliva a sequência STA original e
transfere a porção lumenal da proteína à âncora de
GPI na membrana
• Proteínas GPI realizam difusão relativamente rápida →
↑mobilidade → contribui para os lipid rafts
