DINÂMICA DO TRÁFEGO INTRACELULAR

Question 1

No que consiste a secreção constitutiva

Answer 1

Secreção constitutiva - vesículas de transporte saem do TGN regularmente, contendo proteínas membranares e lípidos que
fornecem novos componentes para a membrana plasmática, enquanto algumas proteínas solúveis são secretadas para o meio extracelular.

Question 2

No que consiste a secreção por estímulo

Answer 2

Secreção mediada por estímulo - presente em células secretoras especializadas onde proteínas solúveis e outras substâncias são inicialmente armazenadas em vesículas secretoras e posteriormente libertadas por exocitose.

Question 3

Quando ocorre a secreção por estímulo e a constitutiva?

Answer 3

• A secreção constitutiva é contínua e 
imprescindível para a sobrevivência e 
manutenção da estrutura celular
• A secreção mediada por estímulo 
encontra-se em células especializadas 
para secretarem rapidamente substâncias 
em falta: hormonas, neurotransmissores, 
enzimas digestivas, etc.

Question 4

Em que sentido vão as vesículas que o Golgi forma continuamente (?)

Answer 4

Retrógado.

Question 5

Como se formam corpos multivesiculares

Answer 5

Com a maturação dos endossomas, porções das suas membranas invaginam para o lúmen e formam
vesículas intralumenais. Por causa da sua aparência em microscopia eletrónica, chamam-se corpos
multivesiculares.

Question 6

O que são as cavéolas, e quais as proteínas que as constituem

Answer 6

Cavéolas - outro tipo de vesícula pinocítica que consegue transportar moléculas através do células
endoteliais que formam o revestimento interno dos vasos sanguíneos
Estão presentes na membrana plasmática de quase todos os vertebrados e pensa-se que formam os lipid
rafts nessas membranas, ricos em colesterol, glicoesfingolípidos e proteínas ancoradas ao GPI.
Caveolinas.

Question 7

Onde estão armazenados os transportadores de glicose das células adiposas e musculares até que a insulina estimule a célula?

Answer 7

Em endossomas de reciclagem.

Question 8

Quais os 3 tipos de vesículas revestidas?

Answer 8

• COPI - vesículas que evaginam de compartimentos
do complexo de Golgi
• COPII - vesículas que emergem do ER
• Clatrina - transporte de material a partir da
membrana plasmática e entre compartimentos dos
endossomas/Golgi

Question 9

Quais as GTPases associadas a cada tipo de vesícula? Onde se encontram estas proteínas quando inativas?

Answer 9

• ARF - proteínas responsáveis por montar
as COPI e clatrina na membrana do Golgi
• Sar1 - proteína responsável por montar as
COPII na membrana do ER
No citosol, ligadas ao GDP.

Question 10

O que constitui cada triskelion?

Answer 10

3 cadeias

pesadas e 3 cadeias leves de clatrina.

Question 11

Como se formam as vesículas de clatrina?

Answer 11

1. A formação do revestimento induz curvatura na membrana → formação de um coated bud
2. Proteínas adaptadoras ligam os triskelions de clatrina e recetores membranares da substância a ser
   transportada → recrutamento seletivo de membrana e substância para a vesícula
3. Outras proteínas que dobram a membrana e proteínas de cisão são recrutadas ao colo da vesícula a
   evaginar e é induzida curvatura
4. O revestimento é rapidamente perdido após a evaginação da vesícula

Question 12

O que são Clathrin-coated pits

Answer 12

regiões especializadas da membrana que invaginam e formam vesículas cobertas de clatrina. Duram cerca de 1 minuto na célula

Question 13

Ciclo de endocitose mediada por estímulo em vesículas de clatrina

Answer 13

1. Complexos AP2 são recrutados a locais de ancoragem na membrana plasmática e inicia-se a
   montagem da clatrina numa malha poligonal
2. Recetores carregando as cargos são concentrados em pits revestidos através de interações entre sinais
   de tirosina nos domínios citoplasmáticos e as subunidades μ dos AP2
3. A dinamina (GTPase) é recrutada aos pits por interações com a anfifisina, que se liga ao AP2 e à
   clatrina e regula a invaginação da membrana e fissão para libertar as vesículas revestidas com a cargo
   para dentro da célula
4. Sinaptojanina e outros uncoating factors desmontam os constituintes do revestimento e libertam as
   vesículas de transporte para a fusão com endossomas

Question 14

O que é a dinamina, e o que faz (em passos).

Answer 14

Dinamina - GTPase responsável pela libertação de
vesículas revestidas por clatrina
1. Polimerização da dinamina á volta do colo da vesícula
2. Hidrólise de GTP
3. A energia proveniente do passo anterior leva a uma
conformação na dinamina que estica o colo da vesícula até esta se libertar

Question 15

O que é a HSP70 citosólica

Answer 15

chaperone constitutiva encontrada em
todos os eucariotas que usa energia proveniente da
hidrólise de ATP para a induzir despolimerização do coat

Question 16

Endocytic pathway for internalizing low-density lipoproteins (LDL)

Answer 16

1. Recetores de LDL à superfície da célula ligamse à proteína ApoB na camada fosfolipídica da
   LDL e há formação de uma vesícula endocítica
2. Vesículas de clatrina invaginam utilizando o
   mecanismo de dinamina
3. Libertação do revestimento (endossoma
   precoce e fusão com um endossoma tardio). O
   pH acídico leva à libertação das partículas LDL
   dos seus recetores
4. Fusão do endossoma tardio com um lisossoma
   e hidrólise dos lípidos e proteínas da LDL pelas
   enzimas lisossomais
5. Recetor LDL é reciclado para a superfície da
   célula e, devido ao pH do meio extracelular,
   sofre mudanças na sua conformação que lhe
   permite ligar novamente a uma LDL

Question 17

O que é a transferrina e a ferrotransferrina. Ciclo da transferrina.

Answer 17

Transferrina - glicoproteína do sangue que transporta ferro do fígado (principal armazém de ferro no
organismo) e do intestino (local de absorção do ferro) para todas os tecidos
Ferrotransferrina - ligação da apotransferrina (sem ferro) a 2 iões Fe3+
1. Ligação da ferrotransferrina ao recetor membranar
2. Interação entre a cauda do recetor e o complexo
adaptador AP2 incorpora o complexo recetor-ligando
numa vesícula endocítica revestida por clatrina
3. A vesícula é despida do seu revestimento
4. Fusão da vesícula com o endossoma tardio e
libertação dos iões Fe3+ do complexo recetorferrotransferrina (devido ao pH ácido)
5. A apotransferrina permanece ligada ao seu recetor
a este pH e são reciclados juntos até à superfície
6. O pH neutro do meio extracelular leva a libertação
da apotransferrina

Question 18

O que são, qual a função e qual o estado em que podem estar as proteínas RAB?

Answer 18

• GTPases monoméricas
• Têm um papel central na especificidade 
do transporte vesicular
• Alternam entre uma membrana e o 
citosol, dependendo do seu estado
• GDP-bound state → inativas e ligadas a 
uma proteína que as mantém solúveis
• GTP-bound state → ativas e associadas 
a uma membrana ou uma vesícula

Question 19

Passos da atracagem de uma vesícula de transporte à membrana alvo

Answer 19

1. As proteínas Rab ativas interagem com
   Rab effectors que permitem a ligação de
   ambas as membranas
2. As SNARE nas duas membranas ligamse, atracando a vesícula e catalisando a
   sua fusão
3. Durante este processo, a RAB-GAP (não
   aparece na figura) induz a hidrólise de GTP
   pela Rab, ocorrendo a sua dissociação da
   membrana e voltando ao citosol como
   Rab-GDP
4. No citosol, fica ligada à GDI (mantêm a
   Rab inativa)

Question 20

Como se formam exossomas, qual a função.

Answer 20

Em certas circunstâncias, os corpos multivesiculares podem fundir com a membrana plasmática e libertar
vesículas intralumenais para o exterior da célula, chamadas exossomas.
Estes corpos possuem funções reguladoras no sistema imunitário - por exemplo: partículas de HIV
encontradas em exossomas podem funcionar como um “cavalo de tróia” capaz de transmitir o HIV ao ser
absorvido por outras células.