Protocole C: Dispersion et propagation cellulaire (passage des cellules)

Question 1

C1: Préparation du milieu pour la culture des cellules

On utilise quel sérum dans du D-MEM

Answer 1

Du FBS (sérum foetal de bovin)

Question 2

C1: Préparation du milieu pour la culture des cellules

On conserve les milieu à quelle T?

Answer 2

4 degrés

Question 3

C2: Dispersion et propagation de cellules dans altérer leur viabilité

Décrit les 6 étapes principales

Answer 3

1. Observation au microscope
2. Aspiration de la culture et lavage des cellules au PBS
3. Ajout de la solution de trypsine + EDTA
4. Incubation (jusqu’à ce que les cellules soient arrondies)
5. Ajout milieu frais et suspension des cellules
6. Transfert de la suspension dans un tube conique et décompte cellulaire

Question 4

Pourquoi doit-on laver les cellules avec du PBS

Answer 4

Pour enlever toute trace de FBS qui inhibe l’action de la trypsine

Question 5

On incube les cellules cb de minutes après l’ajout de la trypsine?

Answer 5

2 minutes ou jusqu’à ce qu’elles sont arrondies

Question 6

Comment on peut voir le détachement des cellules

Answer 6

Incliner le contenant pour voir si elles glissent. Il ne faut pas incuber plus que nécessaire

*On met ensuite la suspension dans un tube conique et on l’utilise pour le décompte protocole D

Question 7

Sur une plaque de 12 puits, que rajoutons-nous

Elles seront incubées pk?

Answer 7

7 ml d’une suspension de 2 x 10^5 cellules viables/ml
sur 6 puits

Elles seront incubées pour la transfection