Projet 4 théorie Flashcards
Cinétique enzymatique- Vo
Vo,ou vitesse initiale, représente la vitesse de la réaction lorsque la transformation du substrat en produit est
toujours linéaire en fonction du temps. Elle s'exprime en unités par mg protéines dans les conditions définies de
tampon, pH et température.
Cinétique enzymatique-Vmax
Vmax est la vitesse maximale atteinte lorsque tous les sites actifs de l'enzyme sont occupés.Comme Vo,la Vmax est
exprimée en unités d'enzyme par mg de protéines dans les conditions définies de tampon, pH et température. La
Vmax varie proportionnellement avec la concentration de l'enzyme.
Cinétique enzymatique-Km
Km est connu sous le nom de constante de Michaelis et correspond à la concentration de substrat nécessaire pour
atteindre la moitié de la vitesse maximale. C'est la concentration de substrat requise pour occuper 50% des sites
actifs de l'enzyme. Cette constante s'exprime en unités de concentration dans les conditions définies de tampon,
pH et température.Le Km est indépendant de la concentration de l'enzyme et donne des indications sur l'affinité
de l'enzyme pour son substrat.
Cinétique enzymatique- [S]
[S] est la concentration initiale de substrat dans la réaction enzymatique. Cette concentration est donnée en unités
de concentration.
Lorsqu’un inhibiteur se lie…
A. Exclusivement à l'enzyme libre, l'inhibition est dite compétitive, car la liaison de l'inhibiteur et du substrat
sur l'enzyme est mutuellement exclusive. Par conséquent, le Km augmente tandis que la Vmax ne varie pas.
B. À l'enzyme libre et au complexe ES, l'inhibition est dite non compétitive. Dans le cas oùl'affinité de
l'inhibiteur pour l'enzyme libre et pour le complexe enzyme-substrat est équivalente, le Km ne varie pas et la
Vmax diminue.
C. Exclusivement au complexe ES, l'inhibition est dite incompétitive. Avec la liaison de ce type d'inhibiteur au
complexe, les Km et Vmax diminuent.
Comaprer inhibiteur
Pour comparer des inhibiteurs entre eux ou l'effet d'un inhibiteur sur différentes cibles, on utilise
généralement la constante d'inhibition (Ki ou αKi). Cette constante peut être calculée lorsque le type
d'inhibition est connu ainsi que l'ICso de l'inhibiteur pour l'enzyme cible.
Mais il faut donc faire la Détermination du type d’inhibition :
- Expérimentation pour tracer graphique M.M et Lineweaver( absence ou présence d’inhibiteur)
Détermination de l’ICso:
tracer une courbe
concentration-réponse en augmentant graduellement la concentration de l'inhibiteur dans des conditions
où les concentrations d'enzyme et de substrat demeurent fixes. Il est alors possible de déterminer l'ICso
de l'inhibiteur, ce qui représente la concentration d'inhibiteur nécessaire pour diminuer l'activité
enzymatique de 50%.
Calcul de la constante d’inhibition :
la constante d'inhibition peut être
calculée en appliquant l'une des équations de Cheng et Prusoff. Il est toujours préférable d'utiliser Ki ou
αKi plutôt que l'ICso pour comparer des inhibiteurs entre eux, puisque celui-ci fait abstraction des
concentratons de substrat et d'enzyme utilisées dans l'essai.
voir cahier pour calcul p.4
aKi
fait référence à l’affinité de l’inhibiteur pour le complexe ES
Particularité inhibiteur non-compétitif
a<1: I se lie préférentiellement à ES par rapport à enzyme cible
a>1: I se lie plus à enzyme libre que complexe ES
a=1: affinité identique pour les 2
Particularité Inhibiteur incompétitif
Il ne se lie pas à enzyme libre donc a infiniment petit et Ki infiniment grand (IMP de déterminer paramètres)
