Brainscape's Knowledge GenomeTM

Browse over 1 million classes created by top students, professors, publishers, and experts.


See full index

TP Biochimie cibles pharmaco > Projet 1 théorie > Flashcards

Projet 1 théorie Flashcards

1
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium- C’est une technique utilisée comme première étape dans …

A

l’isolement de protéines

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium- C’est basé sur quoi?

A

La différence de solubilité des protéines dans un sel

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-la technique?

A

Une précipitation différentielle des protéines l’échantillon par l’accroissement progressif de la concentration d’un sel

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-Cette méthode de purification qui élimine quoi?

A

-Élimine certaines protéines indésirables
-Enlève des produits solubles non-voulus
-Concentre l’échantillon tout en maintenant l’activité biologique et la conformation des protéines

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium- Généralités du sel

A

-Peu couteux
-Très solubles, même à de fortes concentrations
-Dissolution n’affecte pas la température de la solution
-Dissolution dénature pas les protéines—»conserve activité de la protéine d’intérêt

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium- Ce sel induit l’agrégation et la précipitation des protéines en réduisant leur solubilité par 2 phénomènes…

A

-Une compétition pour les molécules d’eau disponibles en solution (déshydratation)
-Une neutralisation des résidus chargés à la surface des protéines

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-salting-in vs salting-out

A

Salting-in: plus la concentration de sel augmente (juste un peu), la solubilité de la protéines augmente drastiquement et à une haute concentration de sel la solubilité diminue rapidement. Il y a un plateau entre les 2

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium- explique la méthode

A
  1. Ajoute lentement et graduellement sel jusqu’à une concentration qui ne cause pas la précipitation de la prot d’intérêt—» les autres prot à cette concentration sont éliminés, car ils précipitent et on centrifuge
  2. Le surnageant contient la prot d’intérêt et d’autre protéines solubles
    3.D’autre sulfate d’ammonium est ajouté jusqu’à une concentration qui fait précipiter la protéine d’intérêt
  3. Centrifuge et le surnageant qui reste contient des protéines indésirables solubles et on conserve le culot contenant la protéine d’intérêt
    5.Dissolution de celui-ci dans un tampon faible en sel (pk peu de sel?–»car une forte concentration en sel peut se retrouver dans la solution protéique et nuire
  4. Enlève sel de l’échantillon
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-Décrit dans quoi on retrouve l’albumine

A

-Sérum de bovin
-60% d’albumine et 35% de globulines

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium- décrit le BSA

A

583 a-a
66kDA
BSA ressemble à HSA (humaine)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-différence entre BSA et HSA

A

BSA: 2 résidus tryptophane(Trp-134 et Trp-212)
HSA: 1 résidu tryptophan (Trp-214)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-Fonction de l’albumine

A

-mainteint pression osmotique
-transport variété de substance comme hormone, AG et mol pharmacologiques

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Isolement d’albumine par précipitation au sulfate d’ammonium-charte

A

Voir charte p.4 projet 1

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Élimination du sulfate d’ammonium par colonne de dessalage-généralités colonne de dessalage

A

-Chromatographie d’exclusion
-Élimine sels de sol protéique
-Utilisation tampon pour équilibré
-Molécule sont séparés en fonction de leur taille et de leur forme

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Élimination du sulfate d’ammonium par colonne de dessalage-type de colonne de dessalage utilisé en laboratoire

A

-Cytiva PD-10
-mol de plus de 6000Da excuse de la matrice et sont éludée en 1er= Volume mort
-Sel inclue dans le gel et eluées tardivement
-Enlève sel de l’albumine

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Élimination du sulfate d’ammonium par colonne de dessalage- comment vérifier efficacité du dessalage

A

Avec conductimètre: mesure capacité d’un liquide à faire passer un courant électrique

La conductivité augmente selon la concentration constituants ionisés (microsiemens/cm)

17
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-propriété de liaison et de transport de l’albuminé selon quoi?

A

structure tridimensionnelle des sites de liaison de prot

Si changement de structure = nuit à liaison et transport de certains ligand—» pas d’efficacité d’un traitement et distribution

18
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-Identification et caractérisation de l’albumine

A

-dizaines représentations structurales de l’albumine pour lier un Rx
-Utilisation colorants fluorescent comme ANS pour étudier la liaison de molécule à l’albumine

19
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-Utilisation de l’ANS dans lab

A

1.Liaison ANS-Alb en présence ou non agent chimique qui dénature prot
2.Si AS et tétracycline peuvent déplacer ANS de complexe ANS-Alb

20
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-Principe de la fluorescence

A

-émission de lumière après excitation de molécules particulières par une souche lumineuse qui lui permet d’absorber un photon
-état électronique instable
-Avant excitation, Processus de relaxation non radiatif qui va faire perdre énergie
-Pendant ce moment, energie d’Excitation est transféré par vibration ou chaleur au slv
-La molécule sera dans un état encore excité, mais de plus faible énergie qui pourra revenir dans son état fondamental pour l’émission d’un photon.

21
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-principe d’une MOLÉCULE FLUORESCENTE

A

Molécule qui absorbe énergie lumineuse à une longue d’onde donnée (LONGEUR D’ONDE D’EXCITATION) et réémettre fluo à longueur d’onde plus grande :LONGEUR D’ONDE D’ÉMISSION) selon déplacement de Stokes calcul (longueur d’onde Emission-excitation) pour savoir déplacement

22
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-facteur qui influe fluo d’une molécule

A

-polarité solution
-viscosité milieu
-T
-pH slv
-présence de solutés, comme prot

23
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-appareil qu’on utilise

A

Fluorimètre
1)source lumineuse
2)monochromateur/filtres émissions
3)compartiment pour échantillom
4)un autre monochromateur/filtre excitation
5)détecteur
6)système pour analyser signal

après avoir passer le filtre, une partie de la lumière excite certaines molécules de l’échantillon. lumière émise concentrée par filtre à 90 degré de filtre excitation et captée par détecteur

24
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine- ANS généralités

A

-Fluorescence dépends environnement
-interaction ANS-slv peut affecter paramètre fluo comme longueur d’onde émission, efficacité émission et durée émission
-ANS pas fluo en milieu polaire mais très fluo non polaire environement

25
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-ANS généralités avec alb

A

-ANS se lie région hydrophobe de prot ce qui diminue son interaction avec solvant—» -énergie dissipée et efficacité émission est plus grande
-DOnc fluo à forte intensité à longueur d’onde émission moins grande, mais d’énergie élevée (surface BSA hydrophobe exposée=forte fluo

26
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine- Liaison médicamenteuse selon 2 approches principales

A

1.Méthode de saturation
2.Méthode de déplacement

27
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-Méthode de saturation

A

-Détermine affinité ligand-récepteur
-Ligand souvent marqués
-[Ligand] est augmentée en présence d’une [récepteur] constante
Voir graphique page 14

-Kd: affinité ligand à son récepteur. Que de ligand qui occupe 50% récepteurs
-Bmax:[ligand] maximal qui peut être lié=nb de liaison maximal
-nb de site de liaison (n): quantité de récepteur disponibles, en admettant qu’une molécule de ligand lie 1 site —» graphique Scatchard (la transformation de données fausse erreur expérimentale de sorte qu’elles n’obéissent pas aux hypothèse de régression linéaire. DONC SI DONNE CE GRAPH A EXAM: ON LE PREND PAS POUR DÉTERMINER KM ET BMAX

-facteurs qui influence liaison ligand-récepteur: pH,T,produits chimiques,[ion], agents chaotropiques

28
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-Méthode de déplacement

A

Détermine affinité ligand pour un site de liaison. Compare plus molécule entre elles dans conditions expérimentales identiques

[ligand]marqués fixe et [ligand] croissante non-marqué (inhibiteur) et trace graphique

-IC50: [ligand non-marqué] pour déplacer 50% du ligand marqué des sites de liaisons

29
Q

Étude de liaison de l’ANS à l’albumine-Analyse fluo

A

TP Biochimie cibles pharmaco (6 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2024 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions