Pluripotente stamceller Flashcards
Definer hvad en pluripotent stamcelle er
Er en udifferentieret celler der har evnen til at forme enhver celle i kroppen og med ubegrænset levetid.
Nævn nogle pluripotente stamceller
Embryoniske stamceller
Embryoniske kimceller
Embryoniske carcinoma celler
Inducerede pluripotente celler
Hvornår høste man embryoniske kimceller?
Fra et 5-9 ugers foster
Hvilke teknikker bruges til at lave inducerede pluripotente stamceller?
Nuclear overførsel
Celle fusion
Direkte reprogrammering
Celleeksplantation
Beskriv hvad nuclear overførsel går ud på
Man har en oocyt eller zygot, hvor man fjerner cellekernen.
Beskriv hvad cellefusion går ud på
At man fusionerer cellekerner således at den bliver tetraploid fremfor diploid.
Beskriv hvordan direkte reprogrammering går ud på
Man kan tage en fibroblast, hvor man aktiverer embryone gener der får cellen til at gå tilbage til stamcelle niveau.
Hvilke embryone gener kan man aktiverer i den direkte reprogrammering?
Sox2 OCT4 c-Myc Klf4 Nanog Lin28
Hvad hedder de overflademolekyler som sidder på embryone stamceller?
SSEA-1 SSEA3 SEA-4 TRA-1-60 TRA-1-81 Alkaline phosphat Oct-4
Hvad er forskellen mellem humane og muse embryone stamceller?
Musens ESC har SSEA-1 på sin overflade som den eneste, hvor de humane ESC har alle andre tilstede pånær SSEA-1
Hvad vil det sige at en stamcelle er telomerase aktiv?
At den har ubegrænset levetid, da telomererne aldrig bliver kortere fordi telomerasen forlænger dem.
Hvad betyder teratoma?
Er tumor der indeholder en masse forskellige væv.
Forklar kort hvordan man isolerer humane embryone stamceller
Man behandler først med hormoner så æggene er mest udviklet.
Derefter indsamler man æggene fra ovariet
Dernæst fertaliserer man ægget.
Indermassen af blastocysten overføres til en petrisskål med feeder celler, som er fibroblaster
Efter at være kultiveret et par dage overføres de til en ny petrisskål med feeder celler, hvor der tilføres bFGF hvormed cellerne har dannede embryoniske stamcelle kulturer.
Hvad er specielt ved feeder celler?
De kan ikke proliferer men de er metaboliske aktive.
Hvormange dage skal stamcellerne kultiverer får de har etableret en kultur.
10-14 dage
Hvilke karakteristika har pluripotente celler?
De skal udtrykke gen markørerne: OCT4, NANOG, SOX2 og FGFR4.
Skal udtrykke celler overfalde markørerne SSEA (undtagen 1) og TRA
Skal kunne differentierer sig til alle tre kimlag
Skal have høj telomerase aktivitet.
Hvad står SSEA og TRA for?
SSEA: stage-specific embronic antigens
TRA: tumor rejection antigens
Udover at skulle have de specifikke karakteristika for pluripotente celler, hvilke andre krav er der, som også gælder normale celler?
Karyotypen skal være normal
De skal kunne fryses og optøs
Hvordan kan man skelne mellem de differenterede ESC og feeder celler?
Feeder cellerne differentieres ikke og derfor er de ikke særlig konfluente.
Pluripotente celler har evnen til self-renewal, som er at de kan dele sig til en nøjagtig kopi af sig selv og en dattercelle. Denne evne kan man bevarer når man kultiverer ESC, men hvilke self-renewal faktorer skal man bruge?
Feeder celler
bFGF.
Forklar hvordan man gør fra ESC kultur til specifikke kimceller
Først fjerner man self-renewal faktorer
Dernæst tilføjer man specifikke vækstfaktorer.
Hvilke vækstfaktorer bruges til differentiering til ectodermale celler?
RA
EGF
BMP4
bFGF
Hvilke vækstfaktorer bruges til differentiering til endodermale celler?
HGF
Hvilke vækstfaktorer bruges til differentiering til mesenkymale celler?
Activin A
TGF-beta-1
Hvilke markører kan man kigge efter for at bekræfte at ens ESC er differentieret til ectodermale celler?
Neurogenin 1
Nestin
Neuronal nuclei
Hvilke markører kan man kigge efter for at bekræfte at ens ESC er differentieret til mesenkymale celler?
Osteoprontin
Smooth muscle actin
Sarcomeric actin
GATA-4
Hvilke markører kan man kigge efter for at bekræfte at ens ESC er differentieret til endodermale celler?
Albumin
Alpha fetoprotein
Hvordan kan man ellers bekræfte at ens ESC celler er differentieret til de rette celler uden at se på specifikke markører?
Se på vævet af det.
Hvordan laver man chimera mus?
Man tager en embryo donor, hvor man høster de embryone stamceller, som man injicerer i en værts embryo. Værts embryonet med ESC fra donoren og dens egne ESC overføres til en rugmor. Afkom fra denne er chimera.
Hvilke sygdomme vil man muligvis kunne bruge pluripotente stamceller?
Parkinsons
Diabetes
Hvis man bruger ESC som er donerede til et terapeutisk formål kan man risikerer at værtens immunsystem vil afstøde cellerne, hvilke metoder er der til at undgå dettte?
Man kan genetisk manipulerer ESC til ikke at udtrykke MHC på deres overflade.
Med nukleær reprogrammering kan man erstatte ESCs cellerkerne med cellekernen fra værten således at MHC vil fremvise selv antigener
Man kan give patienten kemoterapi og erstatte patientens knoglemarv med donors således at de hematopoietiske celler differenteres fra donoren, og derved vil immuncellerne ikke angribe de differentierede celler, da de stammer fra samme oprindelse.
Hvilke andre terapeutiske tilgange kan ESC ellers bruges til ud over regenerativ medicin?
Til at teste medikamenter.
Man vil kunne tage ESC fra den specifikke patient og differentierer dem til det væv som man vil have sit medikament til at virke på.
Herved kan man se om patienten kan tåle medikamentet.
Hvad betyder chimera?
At en enkelt organisme er sammensat ad celler med mere end en bestemt genotype.
