Pluripotente stamceller

Question 1

Definer hvad en pluripotent stamcelle er

Answer 1

Er en udifferentieret celler der har evnen til at forme enhver celle i kroppen og med ubegrænset levetid.

Question 2

Nævn nogle pluripotente stamceller

Answer 2

Embryoniske stamceller
Embryoniske kimceller
Embryoniske carcinoma celler
Inducerede pluripotente celler

Question 3

Hvornår høste man embryoniske kimceller?

Answer 3

Fra et 5-9 ugers foster

Question 4

Hvilke teknikker bruges til at lave inducerede pluripotente stamceller?

Answer 4

Nuclear overførsel
Celle fusion
Direkte reprogrammering
Celleeksplantation

Question 5

Beskriv hvad nuclear overførsel går ud på

Answer 5

Man har en oocyt eller zygot, hvor man fjerner cellekernen.

Question 6

Beskriv hvad cellefusion går ud på

Answer 6

At man fusionerer cellekerner således at den bliver tetraploid fremfor diploid.

Question 7

Beskriv hvordan direkte reprogrammering går ud på

Answer 7

Man kan tage en fibroblast, hvor man aktiverer embryone gener der får cellen til at gå tilbage til stamcelle niveau.

Question 8

Hvilke embryone gener kan man aktiverer i den direkte reprogrammering?

Answer 8

Sox2
OCT4
c-Myc
Klf4
Nanog
Lin28

Question 9

Hvad hedder de overflademolekyler som sidder på embryone stamceller?

Answer 9

SSEA-1
SSEA3
SEA-4
TRA-1-60
TRA-1-81
Alkaline phosphat 
Oct-4

Question 10

Hvad er forskellen mellem humane og muse embryone stamceller?

Answer 10

Musens ESC har SSEA-1 på sin overflade som den eneste, hvor de humane ESC har alle andre tilstede pånær SSEA-1

Question 11

Hvad vil det sige at en stamcelle er telomerase aktiv?

Answer 11

At den har ubegrænset levetid, da telomererne aldrig bliver kortere fordi telomerasen forlænger dem.

Question 12

Hvad betyder teratoma?

Answer 12

Er tumor der indeholder en masse forskellige væv.

Question 13

Forklar kort hvordan man isolerer humane embryone stamceller

Answer 13

Man behandler først med hormoner så æggene er mest udviklet.
Derefter indsamler man æggene fra ovariet
Dernæst fertaliserer man ægget.
Indermassen af blastocysten overføres til en petrisskål med feeder celler, som er fibroblaster
Efter at være kultiveret et par dage overføres de til en ny petrisskål med feeder celler, hvor der tilføres bFGF hvormed cellerne har dannede embryoniske stamcelle kulturer.

Question 14

Hvad er specielt ved feeder celler?

Answer 14

De kan ikke proliferer men de er metaboliske aktive.

Question 15

Hvormange dage skal stamcellerne kultiverer får de har etableret en kultur.

Answer 15

10-14 dage

Question 16

Hvilke karakteristika har pluripotente celler?

Answer 16

De skal udtrykke gen markørerne: OCT4, NANOG, SOX2 og FGFR4.
Skal udtrykke celler overfalde markørerne SSEA (undtagen 1) og TRA
Skal kunne differentierer sig til alle tre kimlag
Skal have høj telomerase aktivitet.

Question 17

Hvad står SSEA og TRA for?

Answer 17

SSEA: stage-specific embronic antigens
TRA: tumor rejection antigens

Question 18

Udover at skulle have de specifikke karakteristika for pluripotente celler, hvilke andre krav er der, som også gælder normale celler?

Answer 18

Karyotypen skal være normal

De skal kunne fryses og optøs

Question 19

Hvordan kan man skelne mellem de differenterede ESC og feeder celler?

Answer 19

Feeder cellerne differentieres ikke og derfor er de ikke særlig konfluente.

Question 20

Pluripotente celler har evnen til self-renewal, som er at de kan dele sig til en nøjagtig kopi af sig selv og en dattercelle. Denne evne kan man bevarer når man kultiverer ESC, men hvilke self-renewal faktorer skal man bruge?

Answer 20

Feeder celler

bFGF.

Question 21

Forklar hvordan man gør fra ESC kultur til specifikke kimceller

Answer 21

Først fjerner man self-renewal faktorer

Dernæst tilføjer man specifikke vækstfaktorer.

Question 22

Hvilke vækstfaktorer bruges til differentiering til ectodermale celler?

Answer 22

RA
EGF
BMP4
bFGF

Question 23

Hvilke vækstfaktorer bruges til differentiering til endodermale celler?

Answer 23

HGF

Question 24

Hvilke vækstfaktorer bruges til differentiering til mesenkymale celler?

Answer 24

Activin A

TGF-beta-1

Question 25

Hvilke markører kan man kigge efter for at bekræfte at ens ESC er differentieret til ectodermale celler?

Answer 25

Neurogenin 1
Nestin
Neuronal nuclei

Question 26

Hvilke markører kan man kigge efter for at bekræfte at ens ESC er differentieret til mesenkymale celler?

Answer 26

Osteoprontin
Smooth muscle actin
Sarcomeric actin
GATA-4

Question 27

Hvilke markører kan man kigge efter for at bekræfte at ens ESC er differentieret til endodermale celler?

Answer 27

Albumin

Alpha fetoprotein

Question 28

Hvordan kan man ellers bekræfte at ens ESC celler er differentieret til de rette celler uden at se på specifikke markører?

Answer 28

Se på vævet af det.

Question 29

Hvordan laver man chimera mus?

Answer 29

Man tager en embryo donor, hvor man høster de embryone stamceller, som man injicerer i en værts embryo. Værts embryonet med ESC fra donoren og dens egne ESC overføres til en rugmor. Afkom fra denne er chimera.

Question 30

Hvilke sygdomme vil man muligvis kunne bruge pluripotente stamceller?

Answer 30

Parkinsons

Diabetes

Question 31

Hvis man bruger ESC som er donerede til et terapeutisk formål kan man risikerer at værtens immunsystem vil afstøde cellerne, hvilke metoder er der til at undgå dettte?

Answer 31

Man kan genetisk manipulerer ESC til ikke at udtrykke MHC på deres overflade.
Med nukleær reprogrammering kan man erstatte ESCs cellerkerne med cellekernen fra værten således at MHC vil fremvise selv antigener
Man kan give patienten kemoterapi og erstatte patientens knoglemarv med donors således at de hematopoietiske celler differenteres fra donoren, og derved vil immuncellerne ikke angribe de differentierede celler, da de stammer fra samme oprindelse.

Question 32

Hvilke andre terapeutiske tilgange kan ESC ellers bruges til ud over regenerativ medicin?

Answer 32

Til at teste medikamenter.
Man vil kunne tage ESC fra den specifikke patient og differentierer dem til det væv som man vil have sit medikament til at virke på.
Herved kan man se om patienten kan tåle medikamentet.

Question 33

Hvad betyder chimera?

Answer 33

At en enkelt organisme er sammensat ad celler med mere end en bestemt genotype.