Cornea regeneration

Question 1

Beskriv kort cornea

Answer 1

Den er fuld transparent, avaskulær og innerveret.

Den sidder foran linsen og er en forlængelse af conjuktiva adskilt af limbus.

Question 2

Cornea bliver næret med glukose og oxygen gennem den limbale cirkulation. Bag cornea sidder aqueous humor. Beskriv hvad den består af

Answer 2

Den består af en substans der minder om blodplasma, dog uden proteiner.

Question 3

Hvor lang tid er cornea om at gendanne sig?

Answer 3

9-12 måneder

Question 4

Hvilke lag består cornea af?

Answer 4

Et glat epitel lag
Stroma
Endothel lag

Question 5

Hvad består stroma af i cornea og hvilke funktioner har de?

Answer 5

Kollagen, som former den unikke arkitektur af stromaet

Keratocytter, som producerer krystlin proteiner, der ogs bidrager til at holde formen.

Question 6

Hvilken funktion har endothel laget i cornea?

Answer 6

Regulerer cornea hydrering

Question 7

Hvordan vedvarer cornea sin transparens?

Answer 7

Gennem limbus cellerne.

Question 8

Hvor er limbus placeret?

Answer 8

I kanten af det farvede øje, som er overgangen mellem conjuctiva og cornea.

Question 9

I limbus er de limbale stamceller placeret, hvad hedder de krypter som stamcellerne ligger i?

Answer 9

Palisades of Vogt.

Question 10

Beskriv de forskellige lag af celler og strukturer som er i den Palisades of Vogt

Answer 10

Der er den limbale niche, som består af melanocytter, limbale fibroblaster, MSCs, Langehanske celler.
Derudover er der blodkar, basalmembranen.

Question 11

Hvilken funktion har melanocytter?

Answer 11

De giver farve til mørke øjne.

De beskytter øjet mod UV stråler.

Question 12

Hvordan fungere overgangen fra stamcelle til differentierede corneal epitelceller?

Answer 12

Stamcellerne deler sig hvor en celler forbliver stamcelle og den anden bliver til en tidlig progenitor celler, som ved næste deling bliver til sen progintor celle. Disse celler laver mitotisk deling og differentieres derefter.

Question 13

Hvilken funktion har de Langerhanske celler?

Answer 13

De fungere som dendrit celler.

Og kommer fra mesenkyme celler.

Question 14

Per definition, så er niche celler et miljø de beskytter stamceller fra stimuli som kunne give uønsket differentiering og apoptose. Hvilken funktion har nichen for limbale stamceller?

Answer 14

De beskytter mod shear force.

Question 15

Hvad er ABCG2?

Answer 15

En stamcelle markør.
Det er en ATP bindende cassette subfamilie G medlem 2.
Det er et transport protein, som sidder i cytoplasmaet i flere forskellige typer af stamceller.

Question 16

Hvad er p63?

Answer 16

En transkriptions faktor i P53 gen familien.
Det er udtrykt i cellekernen i keratinocytter med proliferende kapacitet.
Det indikerer derfor at de har evnen til at dele sig.

Question 17

Hvad cytokeratin 3?

Answer 17

Er en differentierings markør.
Den findes specielt i epitel på cornea sammen med keratin 12
Den er associeret med cytoplasmisk farvning af epitel i cornea.

Question 18

Hvilke markører er udtrykt på limbale stamceller?

Answer 18

Meget af ABCG2 og p63

Lidt eller ingen CK3

Question 19

Hvilke markører er udtrykt på tidlige TACs?

Answer 19

Mindre ABCG2 og p63 end stamcellerne men mere af CK3

Question 20

Hvilke markører er udtrykt på sene TACs?

Answer 20

Lidt eller ingen af ABCG2 og p63

Højt af CK3.

Question 21

Hvad går hypotesen om Y x X = Z ud på?

Answer 21

Forholdet mellem celler der kommer og celler der forsvinder. Hvis X er højere end Y kan det lede til sygdom i øjet.

Question 22

Hvilken markør er en prognostisk værdi for CLET?

Answer 22

P63 positive limbale stamceller.

Question 23

Hvad er ABCB5?

Answer 23

Sidder på overfladen af stamceller.
Den er kritisk for epitelial homeostase og reperation.
Den er co-udtrykt med p64 i LESCs

Question 24

Hvordan hænger pigementering sammen med udtrykket af p63 og stemness?

Answer 24

p63 har vist sig at være en bedre progenitor end celler der kun udtrykker ABCB5.
Derudover er det kun p63 der har funktionen at kunne producerer pigment, derfor er der lavede denne association.

Question 25

Hvad er LSCD?

Answer 25

Det er tab af de limbale stamceller i Palisadel of Vogt, som leder til vaskularisering og conjuctivalisering og derved blidnhed.

Question 26

Hvordan kan man få LSCD?

Answer 26

Det kan være arveligt: congenital aniridia.
Pålagt: termisk eller kemikalske skader, Stenven - Johnson syndrom, kontaktlinser
Iatrogene faktorer: operationer.

Question 27

Hvilke symptomer er der på LSCD?

Answer 27

Irritation
Fotofobia
Smerte
Nedsat syn

Question 28

Hvilken nuværende behandling er der er LSCD?

Answer 28

Kultiverede limbal epitel transplantation (CLET)

Question 29

Hvordan udføres en CLET?

Answer 29

Man tager en biopsi fra donor øje.
Kultiverer det på amnionisk membran og lader det ligge i kultur medie.
Derefter fjernet det fibrovaskulære pannus fra modtagerens øje og den nye cornea påsættes og sys på.

Question 30

Hvad er succes raten for CLET?

Answer 30

80 %

Question 31

Hvilke autologe udfordringer er der ved CLET?

Answer 31

At det raske øje kan blive skadet.

Question 32

Hvilke allogene udfordringer er der ved CLET?

Answer 32

Det er svært at finde donorer.

Der er risiko for immun afstødelse.

Question 33

For at godt implantat er antallet af LESCs utrolig vigtigt. For at måle på hvor mange LESCs man har kan man bruge p63 markøren , som en indikator. Hvilke ting skal man være opmærksom på ved at bruge p63 som markør?

Answer 33

Da p63 er et intracellulær protein, skal cellerne først gøres permeable. Derudover er det vigtigt at man ikke kan bruge FACS cellesortering men at man skal bruge en anden form for cellesortering.

Question 34

Selvom CLET er golden standard for cornea transplantation er de ikke optimale grundet det substrat som cellerne vokser på. Hvilke fordele er der ved at bruge amnionisk membran som substrat?

Answer 34

Det har lav immunogenitet
Anti-inflammatorisk
Anti-angiogen
Anti-arvæv

Question 35

Selvom CLET er golden standard for cornea transplantation er de ikke optimale grundet det substrat som cellerne vokser på. Hvilke ulemper er der ved at bruge amnionisk membran som substrat?

Answer 35

Der kan være variabilitet mellem donorer.
Man skal undersøge for patogener, som er ret dyrt.
Derudover er transplantatet ikke helt transparent.

Question 36

Hvilke andre substrater har man til at vokse LESCs på?

Answer 36

Kollagen

Fiskeskæl

Question 37

Hvilke kriterier er der for nye alternative substrater?

Answer 37

De skal være biokompatible
Lav/ingen immunogenitet
Billig
Støtte væksten LESCs

Question 38

Hvilke alternativer til celler kan man bruge i stedet for LESCs?

Answer 38

Oral mucosal epitel

iPSCs

Question 39

Hvilke problemer har der været med transplantat fra orale mucosale epitelceller?

Answer 39

Perifer corneal neovascularisering

Man kender ikke langtidsigtede virkning af transplantatet.

Question 40

Hvilke to metoder er der til at isolerer LESCs?

Answer 40

Isolering ved hjælp af Dispase

Isolering fra eksplantation.

Question 41

Forklar metoden for isolering med dispase

Answer 41

Endothelium fjernes
Dispase tilføjes til at fjerne kollagen og fibrin
Derefter fjernes epitelet og det behandles derefter med trypsin og køres gennem et filter der kun tillader passage af enkelte celler.
Derefter kultiveres de i en kultur flaske.

Question 42

Forklar metoden for isolering af LESCs fra eksplantat

Answer 42

Endothelium fjernes
Eksplantaten skæres i 2 halve og de skæres igen gennem stroma.
Derefter fjernes strom laget og epitellaget fra hinanden.
Epitellaget skæres i 3-6 eksplantater som kommes i en kultur flaske.