Cornea regeneration Flashcards
Beskriv kort cornea
Den er fuld transparent, avaskulær og innerveret.
Den sidder foran linsen og er en forlængelse af conjuktiva adskilt af limbus.
Cornea bliver næret med glukose og oxygen gennem den limbale cirkulation. Bag cornea sidder aqueous humor. Beskriv hvad den består af
Den består af en substans der minder om blodplasma, dog uden proteiner.
Hvor lang tid er cornea om at gendanne sig?
9-12 måneder
Hvilke lag består cornea af?
Et glat epitel lag
Stroma
Endothel lag
Hvad består stroma af i cornea og hvilke funktioner har de?
Kollagen, som former den unikke arkitektur af stromaet
Keratocytter, som producerer krystlin proteiner, der ogs bidrager til at holde formen.
Hvilken funktion har endothel laget i cornea?
Regulerer cornea hydrering
Hvordan vedvarer cornea sin transparens?
Gennem limbus cellerne.
Hvor er limbus placeret?
I kanten af det farvede øje, som er overgangen mellem conjuctiva og cornea.
I limbus er de limbale stamceller placeret, hvad hedder de krypter som stamcellerne ligger i?
Palisades of Vogt.
Beskriv de forskellige lag af celler og strukturer som er i den Palisades of Vogt
Der er den limbale niche, som består af melanocytter, limbale fibroblaster, MSCs, Langehanske celler.
Derudover er der blodkar, basalmembranen.
Hvilken funktion har melanocytter?
De giver farve til mørke øjne.
De beskytter øjet mod UV stråler.
Hvordan fungere overgangen fra stamcelle til differentierede corneal epitelceller?
Stamcellerne deler sig hvor en celler forbliver stamcelle og den anden bliver til en tidlig progenitor celler, som ved næste deling bliver til sen progintor celle. Disse celler laver mitotisk deling og differentieres derefter.
Hvilken funktion har de Langerhanske celler?
De fungere som dendrit celler.
Og kommer fra mesenkyme celler.
Per definition, så er niche celler et miljø de beskytter stamceller fra stimuli som kunne give uønsket differentiering og apoptose. Hvilken funktion har nichen for limbale stamceller?
De beskytter mod shear force.
Hvad er ABCG2?
En stamcelle markør.
Det er en ATP bindende cassette subfamilie G medlem 2.
Det er et transport protein, som sidder i cytoplasmaet i flere forskellige typer af stamceller.
Hvad er p63?
En transkriptions faktor i P53 gen familien.
Det er udtrykt i cellekernen i keratinocytter med proliferende kapacitet.
Det indikerer derfor at de har evnen til at dele sig.
Hvad cytokeratin 3?
Er en differentierings markør.
Den findes specielt i epitel på cornea sammen med keratin 12
Den er associeret med cytoplasmisk farvning af epitel i cornea.
Hvilke markører er udtrykt på limbale stamceller?
Meget af ABCG2 og p63
Lidt eller ingen CK3
Hvilke markører er udtrykt på tidlige TACs?
Mindre ABCG2 og p63 end stamcellerne men mere af CK3
Hvilke markører er udtrykt på sene TACs?
Lidt eller ingen af ABCG2 og p63
Højt af CK3.
Hvad går hypotesen om Y x X = Z ud på?
Forholdet mellem celler der kommer og celler der forsvinder. Hvis X er højere end Y kan det lede til sygdom i øjet.
Hvilken markør er en prognostisk værdi for CLET?
P63 positive limbale stamceller.
Hvad er ABCB5?
Sidder på overfladen af stamceller.
Den er kritisk for epitelial homeostase og reperation.
Den er co-udtrykt med p64 i LESCs
Hvordan hænger pigementering sammen med udtrykket af p63 og stemness?
p63 har vist sig at være en bedre progenitor end celler der kun udtrykker ABCB5.
Derudover er det kun p63 der har funktionen at kunne producerer pigment, derfor er der lavede denne association.
Hvad er LSCD?
Det er tab af de limbale stamceller i Palisadel of Vogt, som leder til vaskularisering og conjuctivalisering og derved blidnhed.
Hvordan kan man få LSCD?
Det kan være arveligt: congenital aniridia.
Pålagt: termisk eller kemikalske skader, Stenven - Johnson syndrom, kontaktlinser
Iatrogene faktorer: operationer.
Hvilke symptomer er der på LSCD?
Irritation
Fotofobia
Smerte
Nedsat syn
Hvilken nuværende behandling er der er LSCD?
Kultiverede limbal epitel transplantation (CLET)
Hvordan udføres en CLET?
Man tager en biopsi fra donor øje.
Kultiverer det på amnionisk membran og lader det ligge i kultur medie.
Derefter fjernet det fibrovaskulære pannus fra modtagerens øje og den nye cornea påsættes og sys på.
Hvad er succes raten for CLET?
80 %
Hvilke autologe udfordringer er der ved CLET?
At det raske øje kan blive skadet.
Hvilke allogene udfordringer er der ved CLET?
Det er svært at finde donorer.
Der er risiko for immun afstødelse.
For at godt implantat er antallet af LESCs utrolig vigtigt. For at måle på hvor mange LESCs man har kan man bruge p63 markøren , som en indikator. Hvilke ting skal man være opmærksom på ved at bruge p63 som markør?
Da p63 er et intracellulær protein, skal cellerne først gøres permeable. Derudover er det vigtigt at man ikke kan bruge FACS cellesortering men at man skal bruge en anden form for cellesortering.
Selvom CLET er golden standard for cornea transplantation er de ikke optimale grundet det substrat som cellerne vokser på. Hvilke fordele er der ved at bruge amnionisk membran som substrat?
Det har lav immunogenitet
Anti-inflammatorisk
Anti-angiogen
Anti-arvæv
Selvom CLET er golden standard for cornea transplantation er de ikke optimale grundet det substrat som cellerne vokser på. Hvilke ulemper er der ved at bruge amnionisk membran som substrat?
Der kan være variabilitet mellem donorer.
Man skal undersøge for patogener, som er ret dyrt.
Derudover er transplantatet ikke helt transparent.
Hvilke andre substrater har man til at vokse LESCs på?
Kollagen
Fiskeskæl
Hvilke kriterier er der for nye alternative substrater?
De skal være biokompatible
Lav/ingen immunogenitet
Billig
Støtte væksten LESCs
Hvilke alternativer til celler kan man bruge i stedet for LESCs?
Oral mucosal epitel
iPSCs
Hvilke problemer har der været med transplantat fra orale mucosale epitelceller?
Perifer corneal neovascularisering
Man kender ikke langtidsigtede virkning af transplantatet.
Hvilke to metoder er der til at isolerer LESCs?
Isolering ved hjælp af Dispase
Isolering fra eksplantation.
Forklar metoden for isolering med dispase
Endothelium fjernes
Dispase tilføjes til at fjerne kollagen og fibrin
Derefter fjernes epitelet og det behandles derefter med trypsin og køres gennem et filter der kun tillader passage af enkelte celler.
Derefter kultiveres de i en kultur flaske.
Forklar metoden for isolering af LESCs fra eksplantat
Endothelium fjernes
Eksplantaten skæres i 2 halve og de skæres igen gennem stroma.
Derefter fjernes strom laget og epitellaget fra hinanden.
Epitellaget skæres i 3-6 eksplantater som kommes i en kultur flaske.
