PCR

Question 1

PRINCIPIOS BÁSICOS

Answer 1

Complementariedad
Dirección 5>3 (requiere que el extremo 3 este libre)

Question 2

Consta de 3 estapas

Answer 2

Desnaturalización
Replicacion
Elongación

Question 3

Componentes

Answer 3

ADN
PRIMERS
DNA POLIMERASA
DNTPS-> desoxinucleotidos
Magnesio->cofactor para activar DNA polimerasa

Question 4

Que son los dNTPs

Answer 4

Desoxinucleotidos libres en forma trifosfatada-> eso le da estabilidad
Los fosfatos le ayudan a formar el enlace fofodiester-> nucleotido-nucleotido

Question 5

Proceso de amplificación

Answer 5

1. Desnaturalización->separa hebras. Puentes de H se rompen con calor
2. Ciclos de amplificación->se repite 35 veces el ciclo
3. Amplificación final->para darle tiempo a la polimerasa de llenar los huecos q no lleno
4. Almacenamiento temporal

Question 6

Describió una modificación de la técnica de PCR tiempo final

Answer 6

Higuchi

Question 7

Pasos PCR tiempo real

Answer 7

Amplificación
-desnaturalización
-alineamiento
-extensión

Detección->mediante fluorescencia
-SYBER green
-TaqMan

Question 8

Fluorescencia que se utiliza para análisis de expresión, es inespecifico.
En medio de la cadena se pone bromuro de etidio->solo se adhiere si es cadena doble

Answer 8

SYBER green

Question 9

Fluorescencia que se utiliza para genotipificar: identifica SNPs y regiones especificas

Answer 9

TaqMan

Question 10

Quienes marcan el sitio de inicio de transcripción y le dicen a la polimerasa que se pegue para que haga otra cadena en TaqMan

Answer 10

Primers

Question 11

Que es la sonda

Answer 11

Pedazo de AND complementario a la base

Question 12

Polimerasa avanza y rompe la sonda en pedazos entonces

Answer 12

Se separa el fluoroforo y hay fluorescencia

Question 13

Ventajas de PCR tiempo real

Answer 13

Posible calcular la eficiencia de la reacción
No necesario correr geles de agarosa para comprobar el resultado
Mayor rapidez y eficiencia en comparación a la d e punto final

Question 14

Aplicaciones

Answer 14

Análisis de expresión-> CÁNCER
Investigación->estudios caso-control.Detección de polimorfismo asoc a enfermedades
Diagnóstico enfermedades->covid

Question 15

Tipos de PCR

Answer 15

Convencional
Cualitativo
Semicuantitativo
Cuantitativo
Múltiple

Question 16

Amplificación de una región genética esp
Se evalúa por medio de gel de agarosa o acrilamida
Diseñas oligo, flanqueas y haces múltiples copias

Answer 16

Convencional

Question 17

Permite identificar presencia o ausencia de un fragmento specifico
Diagnóstico de enfermedades infecciosas

Answer 17

Cualitativo

Question 18

Permite conocer los niveles de expresión de un gen (ARNm)(biopsias)

Answer 18

Semicuantitativo

Question 19

Permite medir la cantidad de microorganismos o en ARNm de un gen en particular
Como referencia una curva con muestras con concentraciones conocidas

Answer 19

Cuantitativo

Question 20

Amplificación de varias regiones génicas en una misma reacción de PCR
Cada región cuenta con su pares de oligos

Answer 20

Múltiple