PCR Flashcards
Requerimientos para hacer una PCR
Secuencia de DNA
Enzima DNA polimerasa
Desoxirribonucleotidos
Primers
Enzima que polimeriza una cadena de DNA tomando como molde una preexistente.
DNA polimerasa
Nombre de la DNA polimerasas?
Taq
DNTP
Desoxirribonucleicos
Cofactor de la DNA polimerasa (taq)
Cloruro de magnesio
Alto contenido en GC
Se utilizan para reconocer secuencias blanco en el DNA molde
Proporcionan un extremo 3’
Forward 5’ a 3’
Reverse 3’ a 5’
Iniciadores de PCR
+Se separan las cadenas DNA
+95ºC (20 a 30 seg)
Desnaturalización del DNA
Primer paso
+Los primers se alinean al extremo 3´
+Tm 50ºC a 60ºC ((4G+C)+(2A+T))
Hibridación
Segundo paso
+La Taq polimerasa actúa sobre el complejo templado de primers
+Agrega dNTP´s complementarios para crear cadenas completas
+72ºC
Extensión
Tercer paso
Que se realiza al final de una PCR
Una electroforesis
Técnica mediante la cual se separan las biomoleculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico
Electroforesis
Amplificación de un segmento de DNA utilizando dos partidores.
Detección mediante gel de agarosa
PCR Estandard
Amplificacion de dos o más segmentos utilizando varios partidores en una sola reacción de amplificación
Detección mediante gel de agarosa
PCR multiple
Sintesis de cADN a partir de ARN mediante transcriptasa reversa seguido de una PCR
RT-PCR
PCR estandard donde se utilizan tinciones o sondas con fluroforos para detección de fragmentos amplificados
PCR tiempo real
+Camara de electroforesis
+Genera campo eléctrico alrededor de un gel
+La cámara cuenta con dos polos que se conectan a una fuente de energía
Elementos necesarios para electroforesis
Cuantos ciclos se realizan para obtener una PCR?
40
PCR estandard el cuantificable?
No, es cualificable
La carga define la velocidad de electroforesis? V/F
Falso
La PCR es una reaccion en cadena de la polimerasa que sirve para obtener copias de genes o fragmentos de ADN? V/F
Verdadero
Para que utilizamos la PCR?
Para amplificar secuencias específicas del ADN codificante
Para poder realizar una carga bacteriana o viral es necesario realizar una PCR tiempo real? V/F
Verdadero
Característica esencial de PCR tiempo real
Cuantificar la cantidad de DNA en la muestra
Conocer el numero exacto de copias amplificadas del blanco
Medir la carga viral o la carga bacteriana de un tejido.
Concentración precisa de ácidos nucleicos en una muestra
Cuantificacion absoluta PCR tiempo real
