Partim Viro - Virustiter bepalen

Question 1

Plaque forming unit assay PFU

Answer 1

• Virusoplossing wordt gebracht op monolaag gevoelige cellen.
• Als de virussen gebonden zijn op de cellen wordt een viskeus medium toegevoegd (zorgt dat virus zich enkel kan spreiden naar omliggende cellen) –> plaque forming
• Een plaque komt overeen met 1 viruspartikel dat initieel 1 cel heeft geinfecteerd.
• De virusverspreiding kunnen we dan gaan bestuderen door een indirecte immunokleuring
• Er wordt een verdunning gemaakt om het virus te kwantificeren.

Question 2

Tissue culture infective dose (TCID50)

Answer 2

De tweede manier om virussen te kwantificeren is het bepalen van de TCID50.

• Ook voor bRSV.
• Geeft de theoretische verdunningsgraad weer om 50% van de geïnoculeerde wells te infectereren.
• Wordt meestal gebruikt als virussen geen plaques aanmaken (kan wel voor plaque vormende).
• Na incubatie wordt gekeken naar percentage celdood (visueel - Giemsa kleuring) en wordt de TCID50 berekend.