Partim bacterio - Voedingsbodems

Question 1

N-bron - Basiselementen voedingsbodem

Answer 1

De meeste microben van klinisch belang vereisen voor een snelle ontwikkeling complexe stikstof-verbindingen zoals de afbraakproducten van eiwitten: peptonen, polypeptiden en aminozuren. Bij de bereiding van voedingsbodems worden vooral peptonen of vleesextracten gebruikt, maar ook bv. ammoniumzouten.

De peptonen zijn meestal afkomstig van eiwitten uit melk of vlees. Ze bevatten naast de stikstofverbindignen ook zouten van Na en K, spoorelementen, vitaminen en groeifactorenen en zijn meestal vrij van koolhydraten

Question 2

C- en energiebron - Basiselementen voedingsbodem

Answer 2

Als onmiddelijke energiebron voegt men aan de meeste voedingsbodems een vergistbaart koolydraat toe, meestal glucose (0,5%) omdat dit door de meesta microorganisme kan gebruikt worden

Question 3

S en P bron - Basiselementen voedingsbodem

Answer 3

Zwavel is meestal afkomstig van aminozuren. Fosfor is aanwezig in verschillende organische extracten of kan als fosfaat worden toegeniend

Question 4

Na+, K+, MG2+ en Cl- - Basiselementen voedingsbodem

Answer 4

Worden meestal als zouten toegevoegd aan het medium

Question 5

Water - Basiselementen voedingsbodem

Answer 5

Vers gemaakte voedingsbodems bevatten meer dan 90%

Question 6

Agar - Basiselementen voedingsbodem

Answer 6

Is enkel aanwezig in vaste voedingsbodems en ontbreek bij vloeibare voedingsbodems. Agar is een product dat bereid wordt uit zeewieren. Het hoofdbestanddeel is een zeer lange ketten van polysacchariden, die NIET door micro-organismen kan afgebroken worden. Als agar opgelost wordt in water en daarna opgekookt wordt tot 100 graden, zal het na afkoelen (onder 45 graden) een gel vormen, die zeer stevig is bij concentraties van 1,5 to 2%

Question 7

Bufferoplossingen

Answer 7

De meerderheid van de commensale en pathogene bacteriën groeien het best bij een neutrale of licht alkalische pH. Schimmels en sommige bacteriën kunnen echter groeien in aanwezigheid van een aanzienlijke hoeveelheid zuur.
Micro-organisme die groeien, geven zure afbraakproducten af aan het voedingsmedium met een daling van de pH als gevolg. Hierdoor wordt de groei van diezelfde micro-organisme geremd. Bufferoplossing voorkomen deze groeiremming door de pH te stabiliseren

Question 8

Groeifactoren - Andere elementen

Answer 8

Toevoeging van groeifactoren zorgt voor een aanrijking van het medium. Dit kan bv. met:

• Gistextract: belangrijke bron van vitaminenen uit de B groep
• Bloed of serum
• Bepaalde enzymen

Question 9

Selectieve inhibitoren - Andere elementen

Answer 9

Zijn stoffen die worden gebruikt om een voedingsbodem selectief te maken, dwz door toevoeging van dergelijke stoffen zullen slechts een of enkele welbepaalde soorten micro-organismen op deze voedingsbodem groeien

Question 10

Voorbeelden Selectieve inhibitoren

Answer 10

• Kristalviolet en galzouten remmen de groei van de meeste gram+ bacteriën
• Natriumazide remt de groe van de meeste gram- bacteriën

Question 11

pH-indicatoren - Andere elementen

Answer 11

pH-indicatoren worden gebruikt om bepaalde biochemische omzettingen te volgen, bv. Zuurvorming uit suiker.

Fenolrood (6,8 - 8,4 geel –> rood)
netraalrood (6,8 -8,0 rood –> geel)

Question 12

Vier grote groepen van voedingsbodems

Answer 12

• Algemene voedingsbodems
• Verrijkte voedingsbodems
• Selectieve voedingsbodems
• Electieve voedingsbodems

Question 13

Algemene voedingsbodems

Answer 13

Algemene laten der groei toe van de meeste (niet Alle)) Micro-organisme, zodat uit een onbekend staal de meeste micro-organisme kunnen geïsoleerd worden

Question 14

Werking TSA

Answer 14

Tryptic Soy Agar

Bevat alle ingrediënten om de meeste micro-organismen te laten groeien

Question 15

Uitzicht TSA

Answer 15

Geen identificatie van de kiem mogelijk

Question 16

Werking TSB

Answer 16

Tryptic Soy Broth

Bevat alle ingrediënten om de meeste micro-organisme te laten groeien

Question 17

Uitzicht TSB

Answer 17

Geen identificatie van de kiem of kiemen mogelijk! Vloeibare tegenhanger van TSA

Question 18

Soorten Verrijkte voedingsbodems

Answer 18

• Bloedagar met Alfa of Beta hemolyse en Gamma-Hemolyse

Question 19

Werking bloedagar

Answer 19

Sommige bacteriën kunnen hemolysines produceren. Dit zijn enzymen die rode bleodcellen, aanwezig in de bloedagar, lyseren. Aan de hand van de verschillende hemolyse patronen worden streptokokken onderverdeeld in 3 groepen (zie uitzicht)

Question 20

Uitzicht Bloedagar

Answer 20

A-hemolyse:
Is een gedeeltelijke hemolyse met een groene verkleuring rond ede kolonies door oxydatie van hemoglobine tot methemoglobine (bv. Streptococccus pneumoniae)

B-hemolyse:
Micro-organismen die hemolysisnes produceren geven op de bloedagar een heldere opklaringszone rond de kolonie, afkomstig van gelyseerde rode bloedcellen (bv. Streptococcus pyogenes)

Y-hemolyse: Geen hemolyse (bv. Streptococcus mutans)

Question 21

Samenstelling bloedagar

Answer 21

Is een TSA verrijkt met 5% bloed (vaak schapen)

Question 22

Selectieve voedingsbodems Algemeen

Answer 22

Selectieve voedingsbodems worden gebruikt om uit een mengflora met diverse micro-organismen bepaalde soorten selectief te isoleren, met uitsluiting van anderen. Ze bevatten dan ook steeds een aantal remmende factoren die sommige micro-organismen zullen doden. De andere kiemen die er niet gevoelig voor zijn, zullen echter wel groeien. Meestal zijn er ook een aantal indicatoren aanwezig, die toelaten een onderscheid te maken tussen de micro-organismen die er wel op groeien

Question 23

Soorten Selectieve voedingsbodems

Answer 23

• Cetrimide agar (Cet)
• MacConkey agar (McC)
• Mannitol Salt phenol-red Agar (MSA)
• Nickerson agar (Nick)
• Sabouraud (dextrose) glucose agar (SAB)

Question 24

Cet algemeen

Answer 24

Cet wordt gebruikt voor de isolatie en differentiatie van Pseudomonas sp.

Question 25

Cet werking + uitzicht

Answer 25

Cetyltrimethylammonium bromide, een oppervlakte-actieve stof behorende tot de antiseptica, inhibeert in lage concentratie de groei van allle kiemen, behalve van Pseudomonas aeruginosa. De pigmentproducite van Pseudomonas aeruginosa Wordt niet geïnhibeerd

Uitzicht: blauwgroen

Question 26

McC algemeen

Answer 26

McC is een matig selectieve agar voor de isolatie van gram- bacteriën

Question 27

McC Werking

Answer 27

Galzouten en kristalviolet inhiberen sterk de groei van gram+ bacteriën. Ook lactose en de pH-indicator neutraal rood hebben een rol in de werking van deze voedingsbodem. De bacteriën, die lactose omzetten zijn namelijk rood en zijn omgeven door een troebele zone. Wanneer lactose wordt omgezet door de kiemen, zal de pH dalen en hierdoor zal een precipitatie van de aanwezige galzouten ontstaan (troebele zone)

Question 28

McC uitzicht

Answer 28

Kleurloze, doorschijnende kolonis = Salmonella, shigella en andere

Grote, rode kolonies, omringd door een troebele zone = E. coli

Grote, rode, mucoïde kolonies = Klebsiella, Enterobacter

Hele kleine, ondoorschijnende, geïsoleerde kolonies = Enterokokken, stafylokokken en anderen

Question 29

MSA Algemeen

Answer 29

MSA is een aangepaste versie van een selectieve agar die eerst beschreven werdt door Chapman om pahtogene stafylokokken in voedingsmiddelen en andere media op te sporen

Question 30

MSA werking

Answer 30

De selectieve werking van deze voedingsbodem steunt op zouttolerantie en vergisting van mannitol. Het hoge zoutgehalte remt de groei van bijna alle bacteriën, uitgezonderd de halofiele, de halotoleranten en de microkokken. Van deze kiemen zet enkel S. aureus mannitol om in zuur. Deze aanzuring wordt aangetoond met de pH-indicatior fenolrood en leidt tot geelverkleuring van de bodem.

Question 31

MSA uitzicht

Answer 31

Gele kolonies = S. aureus

Witte kolonies = niet-pathogene stafylokokken en anderen

Question 32

Nick algemeen

Answer 32

Nick wordt gebruikt voor de isolatie van Candida en andere gisten

Question 33

Nick werking

Answer 33

De aanwezigheid van bismuthsulfie indicator onderdrukt de groei van vele micro-organisme. Enkel Candida en andere gisten ontwikkelen zich normaal. Ze reduceren bismuthsulfiet met een bruine tot zwarte kleur als gevolg

Question 34

Nick uitzicht

Answer 34

Bruine tot zwarte kolonies

Question 35

SAB algemeen

Answer 35

SAB wordt gebruikt voor de isolatie van gisten en schimmels

Question 36

SAB werking

Answer 36

Tamelijk selectieve bodem door hoge suikerconcentratie en de lage pH. Verdere selectiviteit tegenover bacteriën wordt verkregen door toevoegen van antibiotica

Question 37

SAB uitzicht

Answer 37

Zeer divers. Geen identificatie mogelijk, wel uistluiting van bacteriën na toevoeging vna antibiotica

Question 38

Electieve voedingsbodems algemeen

Answer 38

Deze voedingsbodems laten toe de eigenschappen van bepaalde bacteriesoorten te herkennen. Ze leiden tot identificatie van de geïsoleerde kiemen. Vloeibare electieve milieus mogen uiteraard uitsluitend met reinculturen worden geïnoculeerd. Zuiver electieve voedingsbodems bevatten nooit remmende stoffen voor andere bacteriën

Question 39

Incubatietemperatuur - Belangrijke opmerkingen

Answer 39

De temperatuur, waarbij een micro-organisme het best groeit, is niet voor alle dezelfde. Micro-organisme die bij de mens voorkomen hebben over het algemeen 37 graden als optimale groeitemperatuur. Daarom worden in klinische labos kiemen geïncubeerd in een broed stoof bij 35-37 graden. Fungie worden over het algemeen bij kamertemperatuur geïncubeerd.

Question 40

Incubatie van petrischalen - Belangrijke opmerkingen

Answer 40

Petrischalen worden altijd met het deksel naar onder neergezet, om kruiscontaminatie te vermijden en om te voorkomen dat het eventueel gevormde condenswater zich op de bodem zou vastzetten en groeiende kolonies zou verstoren