Observation micro Flashcards
Vrai ou faux? Les principes physiques des microscopes optique et électronique sont similaires?
Vrai
Quel est le premier microscope a avoir été inventé?
Micro optique
vrai ou faux? Les microscopes photonique et optique ne sont pas pareils au niveau du système de lentilles.
Faux, photonique et optique sont des synonymes.
Quelle est la différence entre les longueurs d’onde des photons et électrons et qu’est-ce que cela permet?
les longueurs d’onde des électrons sont plus petites que celles des photons, ce qui permet un grossissement plus grand avec les électrons.
Comment est calculé l’agrandissement final d’un microscope optique?
l’agrandissement de l’objectif est multiplier à celui de l’oculaire.
Quel(s) est(sont) le(s) facteur(s) limitant(s) des microscopes optiques?
La limite de résolution et le contraste
Qu,est-ce que la limite de résolution?
la distance minimale entre 2 points qui peuvent être perçus comme étant distincts.
Quels sont les facteurs entrant en compte pour le calcul de la limite de résolution?
la longueur d’onde et l’ouverture numérique (indice de réfraction plus la moitié de l’angle du cône de lumière entrant dans l’objectif).
Laquelle des deux longueurs d’onde suivantes est meilleur pour avoir un plus grand agrandissement?
400nm ou 700 nm?
Nous voulons la plus petite limite de résolution possible, donc longueur d’onde la plus basse.
Pourquoi l’utilisation de l’huile à immersion est-elle bénifique?
car l’indice de réfraction de l’huile est presque identique à celle du verre, donc cela empêche la déviation des faisceaux entre les deux surfaces.
Pourquoi est-il impossible d’utiliser des longueurs d’onde plus petites que le visible (soit des rayons UV) dans les microscopes photonique?
car le verre, utilisé pour les systèmes de lentilles est opaque aux UV, donc le quartz devrait être utilisé, mais très couteux.
Comment appelle-t’on la distance entre la surface de l’objectif et la lame couvre-objet? Comment influence-t’elle la limite de résolution?
Distance de travail. Elle influence la moitié de l’angle du cône de lumière, donc plus petite est la distance de travail, plus la résolution est bonne.
Qu’est-ce que le contraste?
La capacité de distinguer une structure de son environnement.
Qu’allons-nous observer avec un microscope à fond clair?
Observer des structures sombres sur un fond clair.
Qu’est-ce qu’une préparation à frais? Le contraste est plus élevé ou plus faible?
Une préparation d’échantillon avec aucune intervention, où les organismes sont toujours vivants. contraste plus faible.
Une observation d’une préparation à frais dans un microscope à fond clair permet de déterminer quoi?
La morphologie, la motilité, l’axe de division cellulaire et le corps d’inclusion cytoplasmique des microorganismes.
Qu’est-ce que l’on peut faire pour augmenter le contraste d’un échantillon à observer au microscope à fond clair? Expliquez.
une coloration, exige une fixation (donc mort des cellules, car peu de colorants vitaux) pour étudier plus leur morphologie et arrangement plus en détail.
Quels sont les types de colorations au microscope à fond clair?
simple: un seul colorant où les organismes vont absorber et le fond non, produira coloration uniforme.
différentiel; colo de Gram (plus courant) qui permet la séparation en 2 groupes (positif et négatif), soit absorbation du violet ou du rouge.
Pour quoi est utilisé la technique de coloration alcoolo-acido-résistance?
Pour permettre la reconnaissance de mycobactéries dans des échantillons.
Qu’est-ce qu’on en commun les colorations des endospores, des capsules, des flagelles et des corps cellulaires?
Ce sont toutes des colorations différentielles.
Si on désire étudier la dynamique d’organismes vivants, quel(s) microscope(s) devrions-nous utiliser?
à fond clair (mais mauvais contraste) à fond noir, à contraste de phase et contraste d’interférence différentiel.
Où sont visibles les différences entre les microscopes à fond clair et fond noir?
Au niveau du condensateur, microscope à fond noir: la lumière est projetée de façon oblique (grâce è un cône de Abbe et miroirs) et nous observons les organismes qui dévient cette lumière.
Quel microscope entre fond noir et contraste permet une observation plus détaillée des microorganismes?
à contraste de phase
Quel est le principe de base du microscope à contraste de phase?
principe de mise en phase de la lumière incidente, les différentes structures (ayant différentes densité, composition et réfraction) vont changer la phase de la lumière et donc changer son intensité.
À quel niveau se situe les différences entre microscope fond noir et contraste de phase?
au niveau interne, condensateur et objectif plus anneaux de phase
Vrai ou faux? Le microscope à contraste de phase permet de visualiser des structures fines avec coloration et fixation?
faux, il ne nécessite pas de coloration ni fixation.
Que pouvons-nous observer de particulier en périphérie des microorganismes observer au microscope à contraste de phase?
Un halo de lumière
Quel est le principe de base du microscope à contraste d’interférence différentielle?
utilisation d’une lumière polarisée à angle variable et où une différence de réfraction induit un changement de la polarisation.
Quel genre d’image peut être observer au microscope à contraste différentielle et provenant de quel genre d’échantillon?
des images colorées vivement et impression de 3D, provenant d’un échantillon vivant et non-coloré, non-fixé
Où pouvons-nous voir les différences du microscope à contraste différentielle comparé aux autres?
Au niveau du condensateur qui contient un système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique.
Vrai ou faux? Le microscope à contraste d’interférence différentielle induit un halo de lumière autour des microorganismes lors de leur observation?
Faux, le microscope à contraste de phase oui, mais le différentielle induit plutôt une apparence d’ombre en périphérie.
Quelles sont les limites du microscope à contraste différentielle?
les préparations doivent être transparentes, car si étaient opaques, elle bloquerait la polarisation de la lumière.
Lequel des microscope est le plus couteux et haut de gamme?
celui à contraste d’interférence différentielle
Quelle est la différence entre le microscope à épifluorescence et celui à fluorescence?
epi: rayons UV envoyé vers le bas
fluo: envoyé vers le haut
De quel matériel est construit l’objectif dans un microscope à fluorescence et pourquoi?
En quartz, car s’il était fait de verre, les rayons seraient bloqués
Quel est le principe de base du microscope à fluorescence?
une coloration fluorescente est mise sur l’échantillon qui est ensuite bombardé de rayons UV, les fluo sont excitées en absorbant les rayons et émettent une lumière visible qui est observé par observateur.
Pourquoi retrouve-t’on un filtre sélectif bloquant dans le microscope à fluorescence?
Pour la sécurité et santé de l’observateur, un système de miroir dichroïque laisse passé lumière visible en bloquant lumière UV
Que permet la microscopie à fluorescence quand des fluorochromes vitaux sont utilisés sur échantillon.
Permet de distinguer et de proportionner les cellules mortes des celles vivantes
Qu’est-ce que l’immunofluorescence?
utilisation d’anticorps spécifiques à des protéines ou organismes, qui sont couplés avec fluorochromes. ceux-ci vont reconnaitre des antigènes spécifiques et ainsi être visible par microscopie à fluo/
Qu’est-ce que FISH?
C’est une technique de détection spécifique d’une espèce qui implique des sondes ADN fluo, qui vont s’hybrider avec ADN complémentaire de différentes espèces d’organismes et ensuite vont pouvoir être observé par fluo.
Vrai ou faux? pour une hybridation in situ, les organismes restent vivants.
Faux, les microorganismes sont lysés avant
Qu’est-ce que permet de faire FISH?
la quantification des proportions
En quelle année fit son apparition le microscope électronique? Et qui en est responsable?
1931, par Ruska (Nobel en 1986)
Vrai ou faux? le microscope électronique permet d’observer des microorganismes plus petits que ceux photoniques. élaborez
vrai, structures plus petites et plus fines, car limite de résolution est plus basse.
la plus petite limite de résolution possible (pour un bon microscope photonique) est de 0.1micron. Quelle est-elle pour l’électronique? Qu’est-ce qui en est la cause?
0.05nm, grâce à la longueur d’onde beaucoup plus petite des électrons comparé aux photons
la microscopie électronique offre un agrandissement plus grand ou plus petit que le photonique?
plus grand
Pourquoi faut-il placer les microscopes électroniques dans des endroits avec peu ou pas de vibration?
car cela pourrait nuire à la limite de résolution, en raison du détecteur numérique faisant parti des pièces pour produire l’image
Que retrouve-t’on de spécial dans le condensateur, les objectifs et les oculaires des microscopes électroniques?
Des électro-aimants et lentilles magnétiques
Pourquoi les microorganismes sont obligatoirement morts pour être observer au microscope électronique?
car les électrons voyagent dans le vide, donc le vide doit être fait dans le microscope et donc la vie est impossible à garder.
Pourquoi le caractère de non-pénétrance des électrons est une limite à la microscopie électronique?
Car si les microorganismes sont trop épais, les électrons ne pourront pas passer, il devra donc y avoir coupe ultrafine des échantillons et des altérations sont possibles
Quel est le problème avec le fait que le matériel vivant soit non-électron dense pour la microscopie électronique?
Cela signifie qu’il n’y aura pas de différence entre la structure de l’échantillon et l’environnement de celui-ci, donc le contraste sera beaucoup plus bas.
Quelle sorte de coloration (pas coloration) peut être utilisé en micro électronique? Qu’est-ce que cela permet de faire ?
Des métaux (fer, or, aluminium) ou acide phosphotungstique qui permettra d’augmenter le contraste.
Qu’est-ce que la technique d’ombrage?
C’est une technique de préparation de l’échantillon pour la microscopie électronique. On envoie un jet de métaux sur échantillon avec un angle précis qui va projeter une ombre qui sera comparé à une connue pour mesurer taille d’organismes inconnues.
Les électrons vont absorber ou traverser les structures ayant des métaux…? comment cela se verra sur l’image finale observable?
Les électrons vont être absorbés par les structures recouvertes de métaux, donc seront sombres et les parties non recouvertes de métaux seront claires.
Avec la technique de coloration négative de microscopie électronique, qu’est-ce qui sera observable?
l’acide phosphotungsique s’accumulera dans les creux, donc apparaitront sombres sur l’image en raison de l’absorption des électrons par ceux-ci et les reliefs hauts seront claires.
Qu’est-ce que le cryodécapage et à quoi est-ce jumelé?
c’est une technique de préparation pour la micro électronique où l’échantillon est congelé à très basse température et rapidement puis casser aux zones de faiblesse. jumelé à la technique d’ombrage ensuite pour voir intérieur des cellules…
Pouvons-nous dire que l’immunofluorescence et l’immuno-localisation sont pareils?
Non, puisqu’ils ne sont pas utilisé pour le même type de microscopie, mais les deux utilisent des anticorps spécifiques pour trouver des protéines.
À quoi est jumeler l’anticorps en immuno-localisation et comment cela apparait-il sur l’image finale?
Jumelé à des billes de métaux fer ou or, puis localise la protéine ciblée. Apparaitront sombres sur images, car électrons absorbés par métaux.
Quels sont les types de microscopes électroniques?
à transmission et à balayage
Comment différencier une image obtenue par microscopie à transmission comparé à balayage?
Les images en micro à transmission sont par transparence, donc on voit l’intérieur de la cellule. Alors qu’à balayage, nous voyons que la surface de la cellule avec effet 3D
La limite de résolution est plus petite pour quel type de microscope électronique? Lequel permet un agrandissement plus grand?
Celui à transmission à une limite plus petite et permet un plus grand agrandissement.
À quoi fait référence le préfixe cryo, dans la cryotomographie électro?
Au fait que l’échantillon étudié est plongé rapidement dans liquide à basse température et maintenue ainsi durant l’observation, ce qui permet d’avoir moins d’altérations et conservation de l’intégrité des structures.
Donnez des exemple de structures que la cryoélectromicroscopie a permis de modéliser?
Protéine spike et SARS-CoV-2 (COVID)
Comment l’image est reconstitué en cryotomographie électro?
Les images de l’échantillon sont prises en strates, sans coupures directes de l’échantillon mais seulement par la prise d’images en coupe puis reconstruite par ordinateur.
Quel source est utilisé pour la microscopie confocale?
rayon laser UV
Quelles sortes de microorganismes sont détectées par la microscopie confocale à balayage ?
des microorganismes naturellement fluorescents ou ceux couplés avec fluorochromes.
Qu’est-ce que l’exclusion du plan au foyer signifie pour la microscopie confocale? Quelle est l’influence sur le contraste et l’interférance?
grâce à une ouverture au niveau de l’objectif, les rayons émis par les étages inférieurs et supérieurs sont bloqués pour avoir une image nette sans autre perturbation lumineuse. Meilleur contraste et moins d’interférence.
Pourquoi dit-on que le microscope confocal permet de réaliser des images en 3D et 4D?
Puisque le laser balayage horizontal, vertical et temporel. Permet donc de faire des bio-films informatiquement.
Quelles sont les applications du microscope confocal?
détection ou localisation de structures dans cellule, biofilms vs temps et quantification et positions des cellules mortes vs vivantes
Quel microscope permet l’étude des organismes grâce au déplacement vertical et horizontal d’une sonde et qu’est-ce qui est mesuré?
microscope à effet tunnel (à balayage à sonde) où la sonde mesure le courant entre les nuages électroniques et les liens intermoléculaires.
dans quel milieu les observations au balayage à sonde sont-ils observables?
milieu aqueux
Quelle sorte d’échantillon est étudié par la microscopie à balayage à sonde à force atomique?
ceux qui ne conduisent pas bien l’électricité
Quel coloration est utilisé pour colorer les capsules des bactéries?
L’encre de chine ou nigrosine
Vrai ou faux? Les endospores une fois colorées sont difficiles à décolorer?
Vrai
Quelle structure extra-cellulaire bactérienne doit être entouré de mordant afin d’être colorée?
flagelle
Avec quel objectif est utilisée l’huile à immersion?
ceux à forts grossissement (60-100X)
à quoi est proportionnel le contraste?
proportionnel à la différence de quantité de lumière absorbé par la structure vs l’environnement
Qui est l’inventeur du microscope à fond clair?
Kohler
Qui est responsable de l’invention de la coloration alcoolo-acido-résistance
Ziehl-Neelsen
Quel genre d’échantillon est observé au microscope à fond noir?
organismes vivants, pas de fixation ni coloration
Qui a inventé le microscope à contraste de phase et en quelle année a-t-il gagné un prix Nobel?
Zernike en 1953
Quel est le microscope le plus récent entre le fond noir et le contraste de phase?
contraste de phase
Comment est-ce que possibles que les images observés au microscope de contraste de phase soit colorées?
Elles sortent d’abord en forme sombres sur fond clair, mais des filtres colorées peuvent être mis
Qui est l’inventeur du microscope à interférence différentielle?
Nomarski
Quels microscopes peuvent être intégrer dans le même instrument?
à fond clair, fond noir et contraste de phase car le condensateur est une pièce mobile
De quelle façon les fluorochromes vitaux vont permettre la distinction entre cellules mortes et vivantes?
les cellules vivantes vont les exclure par la membrane cytoplasmique et les cellules mortes vont leur être perméable
Quelle est l’application de l’immunofluorescence dans la microscopie à fluo? Quelle en est la limite?
permet la détection de pathogènes, mais sensibilité des anticorps est la limite
Quel est le grossissement extrême permit par le microscope électronique?
400 000 x
Comment les images des microscopes électroniques sont-elles observables?
avec un écran fluorescent, une plaque photographique et un détecteur numérique
Comment l’échantillon du microscope à transmission est observable? Quel est le principe du microscope?
les électrons vont le traverser, et le détecteur numérique est placé en dessous
Quel est le principe de fonctionnement du microscope à balayage (électronique)?
les rayons sont projetés sur échantillon qui les dévit et les rayons déviés sont captés par un détecteur latéral.
Qui est responsable de l’invention du microscope à effet tunnel?
Rohrer et Binnig (Nobel en 1986)
En 1986, 2 scientifiques ont gagnés des Prix Nobel pour des microscopes, qui sont-ils?
Ruska (pour le microscope électronique) et Rohrer et Binnig pour microscope à effet tunnel
Quel sorte de grossissement est possible avec le microscope à effet tunnel?
10 exposant 8
Dans quel milieu doit se trouver l’échantillon observable au microscope à forme atomique?
aqueux, sous vide ou ambiants
