Nukleotide und Nukleinsäure Flashcards
Wie sieht Doppelhelix aus?
Basen paaren miteinander über H-Brücken und liegen innen gestapelt vor, hydrophiles Zucker-Phosphat außen
GC-Paar stabiler (mehr H-Brücken)
polymerisierte Nukleotide in Richtung 5’-3’
Welche Faktoren beeinfussen die DNA-Stabilität?
Basenstapelung: Pur-Pur > Pur-Pyr > Pyr-Pyr
Metallkationen: inteagieren mit Phosphatgruppen und stabilisieren den Duplex durch Verminderung der Ladungsabstoßung zwischen den Phosphaten
3 DNA Formen
B DNA : häufig in Zellen, rechtsgängig
A DNA: bevorzugte Form von RNA Duplexen, rechtsgängig
Z DNA: spezielle Form, linksgängig
Grundfunktion von Nucleinsäuren
-DNA trägt Erbinformation
-komplementäre Doppelstrangsstruktur ermöglicht semikonsevative Replikation während der Zellteilung
-katalysiert durch DNA-Polymerase, benötigt einen Primer und Nukleosid-5’-Triphosphate
-Transkription: Erzeugung einzelsträngiger NS
Restriktionsnukleasen
sequenzspezifisch
schneidet innerhalb Erkennungssequenz –> Typ II
von Bakterien als Schutz gegen Fremd- DNA entwickelt
Restriktionsfragmente durch Gelelektrophorese nach Größe getrennt und sichtbar gemacht–> Bahnen und Analyse der Fragmentgrößen –> Restriktionskarte
Komponente für Sanger-Kettenabbruchmethode
Primer
dNTPs
DNA Polymerase
markierten ddNTP(s)
PCR (Polymerase Chain Reaction)
Primer für beide 5’-Ende beider Stränge, dNTPs, hitzestabile DNA-Polymerase
-Denaturierung (95 grad): dsDNA in ssDNA zerlegt
-Annealen (40-60 grad): Anlagerung von Primer an komplementären ssDNA
-Amplifizieren :72 grad, um DNA-Polymerase zu aktivieren
Wie läuft Sanger-Reaktion ab?
DNA-Polymerase verlängert Primer, zufälliger Einbau ddNTP führt zu Abbruch –> Sequenz kann abgelesen werden