Morfologisk metodik 3 - Immunohistokemi

Question 1

Antigen

Answer 1

En, för organismen, främmande molekyl som framkallar en reaktion hos immunförsvaret. Reaktionen leder till nybildning av antikroppar

Question 2

Epitop

Answer 2

Den del av antigen dit en specifik antikropp binder. Binder med en kort aminosyrasekvens

Question 3

Antikropp

Answer 3

Glykoprotein (makromolekyl besående av protein och kolhydrat) som produceras i en organism vid antigenstimulering.
Har stor specificitet till det stimulerande antigenet

Question 4

Vilka fem klasser finns av antikroppar?

Answer 4

IgA, IgD, IgE, IgG & IgM

Question 5

Generell uppbyggnad, antikropp

Answer 5

Två lätta och två tunga proteinkedjor, sammanlänkade med disulfidbryggor, bildar tillsammans en Y-formig molekyl.

Question 6

Fab-domän

Answer 6

Topparna på “y’et”, bestående av en tung och en lätt kedja. Dessa är hypervariabla, och bildar antigen-bindande regioner (Fab-regioner)

Question 7

Fc- region

Answer 7

I antikroppens svans. Kan binda till komplementära komponenter, och/eller receptorer på cellytan

Question 8

Polyklonala antikroppar

Answer 8

Härstammar från flera cell-linjer-> heterogen samling (=flera olika antikroppar) riktade mot flera olika epitoper

Question 9

Monoklonala antikroppar

Answer 9

Härstammar från en enda cell-linje-> identiska antikroppar riktade mot en epitop.

Question 10

Hur produceras antikroppar?

Answer 10

B-lymfocyter har membranbundna antikroppar bundna till sin yta. Då ett främmande antigen binder in till en B-cell som har antikropp som passar antigenet på sin yta differentierar denna till plasmacell, som producerar fler av samma antikropp som utsöndras.

Question 11

Hur binder antikroppen till antigen?

Answer 11

Antikroppens binding-site känner igen en epitop på antigenet, och binder sig dit mha Van der Waal’s krafter, vätebindningar, elektrostatiska interaktioner och hydrofobiska krafter

Question 12

Vad menas med affinitet?

Answer 12

Affinitet innebär styrkan i reaktionen mellan en antigen-epitop och en antikropp, och det styrs av hur väl antigenets epitoper formmässigt passar in i antikroppens binding-site

Question 13

Vad menas med aviditet?

Answer 13

Sammanlagda styrkan mellan en antikropps binding-site och ett antigen, vilket beror på hur många binding-sites på en antikropp som binder till samma typ av epitop. Aviditeten är beroende av den sammanlagda affiniteten mellan en binding site och epitopen

Question 14

Vad menas med specificitet när man pratar om antikropp-antigen-bindning?

Answer 14

En enskild antikropps förmåga att binda till endast en specifik antigen-epitop

Question 15

Vad menas med korsreaktion när man pratar om antikropp-antigen-bindning?

Answer 15

En enskild antikropps förmåga att binda till fler än en antigen-epitop, eller en epitop som inte passar perfekt

Question 16

Specifik inbindning

Answer 16

Bindning mellan antikropp och antigen till avsedd epitop

Question 17

Ospecifik inbindning

Answer 17

Bindning beror ej på anitkropp-antigen-reaktion, och vill undvikas. Exempel: Endogent peroxidas/fosfatas, endogent biotin

Question 18

Hur förhindras ospecifk inbindning till endogent peroxidas?

Answer 18

Mha väteperoxid

Question 19

Hur förhindras ospecifk inbindning till endogent biotin?

Answer 19

Mha avidin och biotinlösning

Question 20

Vad står ELISA för?

Answer 20

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay

Question 21

ELISA, princip

Answer 21

Antigen binder till brunnarnas väggar. Prov tillsätts. Provets antikroppar reagerar med brunnarnas antigen

Question 22

När används ELISA?

Answer 22

När man vill kvantifiera och detektera en antikropp eller ett antigen

Question 23

Vad står FACS för?

Answer 23

Flourescence Activated Cell Sorting

Question 24

FACS, princip

Answer 24

Celler i lösning märks med flourescerande antikroppar (och får en laddning). Cellerna passerar en laser -> separation utifrån storlek och grunlighet
Flourescensen mäts. Mängden ljus motsvarar mängden celler av en viss typ (olika celler sänder ut olika flourescensmönster).
Cellerna passerar laddade plattor och sorteras utifrån sin laddning

Question 25

Direkt metod

Answer 25

Man använder sig av en antikropp, som är konjugerad med t.ex. ett enzym

Question 26

Indirekt metod

Answer 26

Man använder sig av flera antikroppar, som man bygger en kedja av. Om t.ex. primära antikroppen är musantikropp, är den sekundära anti-musantikropp.

Question 27

Hur namnges metoder?

Answer 27

• Efter det enzym-immuno-komplex som användes
  PAP = Peoxidas anti-peroxidas
  APAAP = alkalisk fosfatas anti-alkalis fosfatas
• Efter molekyler bundna till biotin
  ABC = Avidin/steptavidin-biotin-enzym-komplex
  LAB/SLAB = Labelled avidin/laballed streptavidin-biotin
  CSA = en ABC-metod + Catalyzed signal-amplification
  Envision = Dextranpolymer som de sekundära antikropparna är fästa vid

Question 28

Vad händer med resultatet om antikroppen binder till fel eller flera olika epitoper?

Answer 28

Det skulle ge ett falskt positivt analyssvar.

Question 29

Vad händer med resultatet det förekommer antikropp-bindande endogena komponenter?

Answer 29

Det skulle ge ett falskt positivt analyssvar.

Question 30

Exempel på vad som skulle ett falskt negativt analyssvar? (5)

Answer 30

• Prepareringen har förstört epitoperna (t.ex. snitt har torkat)
• Maskerade epitoper
• Glömt antikropparna/för svag antikropps-koncentration
• Paraffin kvar på snittet
  Gamla lösningar

Question 31

Hur kan maskerade epitoper uppkomma, och hur undviker man dem?

Answer 31

Maskerade epitoper kan uppkomma vid gelerande fixering. Dessa undviks genom att man tillsätter en retrieval buffer.