Cellodling

Question 1

Optimala förhållanden i CO2-inkubator

Temperatur, Luftfuktighet och pH

Answer 1

• Temperatur 37oC
• Luftfuktighet 95-98 %
• pH 7,2-7,5

Question 2

Hur förvaras celler?

Answer 2

-80 - -130C (kort förvaring), i flytande kväve i -196 C (långtidsförvaring). Celler kan även förvaras i frystorkat tillstånd

Question 3

Varför kan celler lätt kontamineras?

Answer 3

Eftersom de saknar immunsystem

Question 4

Vad finns det för symtom vid kontaminering?

Answer 4

• Färgomslag (grumligt medium)
• Förändrad tillväxthastighet
• Förändrad morfologi
• Cellprodukter
• Celldöd

Question 5

Vad ingår i basala odlingsmedier? (7)

Answer 5

• Aminosyror (8 essentiella och 5 icke är med i mediet. Flera kan läggas till vid behov)
• Vitaminer
• Glukos (viktig näringskälla för cellens metabolism)
• Buffertsystem (koldioxid/bikarbonat)
• Salter
• pH 7,2-7,5 + pH-indikator
• Osmolaritet (ca 290 osmo/l)

Question 6

Varför finns det pH-indikator med i odlingsmediet?

Answer 6

För att kunna se om näringsämnena har förbrukats

Question 7

Vad menas med komplett medium?

Exempel på innehåll

Answer 7

Tillsatser till basala mediet för att cellerna ska trivas bättre.
Exempel: Antibiotika, Tillväxtfaktorer, Insulin, FCS (fetal kalv serum, pga. innehåller många adhesionsfaktorer och salter)

Question 8

Vilka tre typer av odlingsbehållare finns?

Answer 8

Flaskett, petriskålar och tolv-/sexton-/96-hålsplattor

Question 9

Adherenta celler

Answer 9

Fäster vid en yta och växer och delar på sig. T.ex. epitelceller, bindvävsceller, muskelceller

Question 10

Suspensionskultur

Answer 10

Vävnadsvätskor, t.ex. celler som finns i blodet (leukocyter, monocyter etc.)

Question 11

Primär kultur

Answer 11

Passage 1. Vävnadsodling direkt från djur/människa

Question 12

Cellinje

Answer 12

Passage 2. Celler från primär kultur som har överförts till ny odlingsbehållare.

Question 13

Etablerad cellinje

Answer 13

Kan genomgå oändliga passager, t.ex. cancerceller. Oftast genetisk annorlunda från primärkulturen

Question 14

Aktiv adhesion, fyra steg

Answer 14

Adsorption
Initial kontakt
Vidhäftning
Utbredning

Question 15

Adsorption

Answer 15

Steg 1 i aktiv adhesion

Cellen bildar och frisläpper proteiner (=adhesionsfaktorer) i cellmediet, som fäster sig på ytan

Question 16

Initial kontakt

Answer 16

Steg 2 i aktiv adhesion

Cellerna har utskott, s.k. filopodia, som får kontakt med adhesionsfaktorerna

Question 17

Vidhäftning

Answer 17

Steg 3 i aktiv adhesion

Andra ligander och receptorer hittar varandra -> celler vidhäftar sig till ytan

Question 18

Utbredning

Answer 18

Steg 4 i aktiv adhesion

Då cellen “känner sig trygg” utbreder den sig, växer och delar sig

Question 19

Konfluens

Answer 19

Täthet av celler i en odlingsbehållare. Kan ses i mikroskop, och bestäms genom att man uppskattar andelen av behållaren som är täckt av celler. Anges i %

Question 20

Vid vilken konfluens bör celler skördas?

Answer 20

Vid 70-90% konfluens

Question 21

Vad händer vid 100% konfluens?

Answer 21

Cellerna börjar växa på varandra, och “döda” varandra