Mikroskopi

Question 1

Vad menas med fasförskjutning, och när sker det?

Answer 1

Om ljusabsorptionen är för låg för att det ska bli tillräckliga amplitudförändringar för en synlig färgförändring sker en fasförskjutning. Den kan inte ses, men den innehåller ändå mycket information

Question 2

På vilka fyra sätt påverkas ljus när det passerar optik eller annat material?

Answer 2

Reflektion, Refraktion, Diffraktion & Dispersion

Question 3

Reflektion

Answer 3

Är en abrupt ändring av riktningen för en vågfront på en yta mellan två olika media, så att vågfronten går tillbaka i det mediet den kom från, som i en spegel

Question 4

Refraktion

Answer 4

Ljusstrålars brytning vid övergången mellan två ämnen med olika brytningsindex -> ljuset ändrar hastighet

Question 5

Vad är brytningsindex?

Answer 5

Även kallat refraktionsindex. Är ett mått på ljusets hastighet genom ämnet

Question 6

Diffraktion

Answer 6

Ljus böjer av och breder ut sig då det kommer till ett hinder eller en öppning. Hur mycket ljuset böjer av och breder ut sig beror på våglängd och storlek på hindret

Question 7

Dispersion

Answer 7

Ljus bryts upp i sina färgsbeståndsdelar när vitt ljus går genom en prisma, dvs man får ett spektrum.

Question 8

Vilka typer av strålgång finns och hur fungerar de?

Answer 8

• Transmitterande strålgång - ljuset går genom hela provet, från lampa till okular. Som i ett vanligt ljusmikroskop
• Reflekterande strålgång - ljuset reflekteras eller emitteras från provet. Går via en speciell typ av spegel

Question 9

Mikroskopstekniker (7 st)

Answer 9

Ljusfält, mörkfält, faskontrast, DIC (Differential interference contrast), polarisation & fluorescence

Question 10

Ljusfältsmikroskopi

Answer 10

• Enklaste tekniken
• Ljuskälla och köhlerinställd kondensor behövs
• Valfritt objektiv med valfri förstoring
• Dålig kontrast i transparenta preparat
• Kräver färgning av preparat
• Färgning av döda preparat

Question 11

Mörkfältsmikroskopi

Answer 11

• Kontrast skapas i transparanta och ofärgade preparat, som då framträder ljust mot en svart bakgrund -> ökar kontrast och ger en 3D-känsla
• Disk blockerar ljuset och skapar en ringformad ljuskon. Preparatet träffas av ljus från sidorna

Question 12

Faskontrastmikroskopi

Answer 12

• Olika strukturer “saktar ner” vissa ljusvågor -> ljusvågorna kommer ur fas
• Fasförskjutna strukturer kommer framträda som ljusa, resp. mörka, och bakgrunden kommer förbli grå

Question 13

DIC-mikroskopi

Answer 13

• Polariserat ljus splittas upp så att det passerar preparatet strax intill varandra. Tjocka delar orsakar fasskifte mellan ljusvågorna

Question 14

Fluorescencemikroskopi

Answer 14

• Ljus av olika våglängder ses som olika färger
• Fluorokrom = molekyl som avger ljus av en specifik våglängd
• Reflekterad strålgång
• Olika fluorokromers excitation- och emissions-spektra kan överlappa varandra

Question 15

Vad är N.A?

Answer 15

Numerisk apertur. Förmågan att fånga upp ljus och synliggöra små detaljer vid ett givet W.D (work distance). Hög N.A = Hög upplösning.

Question 16

Upplösning, definition

Answer 16

Det minsta avståndet där vi kan urskilja två punkter som separata

Question 17

Kromatisk aberation

Answer 17

ljus av olika våglängder (dvs olika färger) bryts av olika mycket när det passerar genom en glasprisma.

Question 18

Sfärisk aberation

Answer 18

ljus som bryts i kanten av linsen fokuseras inte i samma fokalpunkt som ljus som passeras genom linsens centrum.
Kan minskas genom användning av aperturbländaren, för att avskärma de perifera strålarna

Question 19

Astigmatism

Answer 19

Cirkulära strukturer avbildas som oskarpa och ovala.

Undviks mha stigmatorer (=elektriska eller magnetiska fält)

Question 20

Funktion, aperturbländare

Answer 20

Reglera upplösning, kontrast och färgnyans

Question 21

Funktion, ljusfältsbländare

Answer 21

Reglera hur mycket av synfältet som ska belysas

Question 22

Funktion, kondensor

Answer 22

Fokusera ljuset på preparatet

Question 23

Vad står SEM för?

Answer 23

Svepelektronmikroskop

Question 24

Vad står TEM för?

Answer 24

Transmissionselektronmikroskop

Question 25

TEM

Answer 25

• Genomstrålning av tunna objekt
• Visar detaljerad bild av celler och dess organeller
• Ger en 2D-bild
• Oftast tunna snitt

Question 26

Fixering, TEM

Answer 26

• Fysikalisk - frysning(kryo) eller mikrovågsbehandling
• Kemisk - medel med lämplig jonsammansättning & osmolaritet, och förmåga att bibehålla konstant pH-värde.
  Vid kemisk fixering görs ofta dubbelfixering:
• Primärfixering - formaldehyd eller glutaraldehyd, eller en kombination av båda
  Postfixering - osmiumtetroxid

Question 27

Dehydrering, TEM

Answer 27

Organiska lösningsmedel i stigande koncentration (t.ex. etanol, metanol, aceton)

Question 28

Inbäddning, TEM

Answer 28

Härdplast. Antingen epoxyplast eller akrylatplast.

Question 29

För- och nackdel, epoxyplast

Answer 29

Fördel: krymper vävnaden enbart med 2%, jämn polymerisering, stabil i e-strålen
Nackdel: hydrofob, högviskös, polymeriserar i värme (60C)

Question 30

För- och nackdel, akrylplast

Answer 30

Fördel: hydrofil, lågviskös, polymeriserar både i rumstemp och i - grader
Nackdel: krymper vävnaden 10-20%, ojämn polymerisering, mindre stabil i e-strålen

Question 31

Krav på plasten som används vid inbäddning av TEM-preparat (5)

Answer 31

• Låg viskositet
• Uniform polymerisering (härdning)
• Ingen volymförändring
• Lämplig hårdhet
• Stabil och jämn kvalitet

Question 32

Snittning, TEM (4)

Answer 32

• Intsrument: ultramikrotom (ultrotom)
• Kniv: glas eller diamant
• Triming: till formen av en trapetsoid (platt pyramid)
• Snittningstjocklek: 60-70 nm

Question 33

SEM

Answer 33

• Används för att studera objekts topografi (ger 3D-bild)

Question 34

Varför måste preparatet vara torrt vid arbete med SEM?

Answer 34

För att mikroskopet arbetar i högvakuum

Question 35

Hur fixeras SEM-preparat?

Answer 35

Dubbelfixering.
Primärfixering: aldehydfixering
Postfixering: enligt OTOTO-metod, dvs. upprepad osmifiering

Question 36

Dehydrering, SEM

Answer 36

Stigande koncentrationer av etanol

Question 37

Vad menas med konduktiv montering (SEM)?

Answer 37

Preparatet sitter fast på metall (jordat). Om inte kan man få överslag i mikroskopet