Microscopie Flashcards
Si petit faisceau de lumière (petite longueur d’onde), alors y-a-t-il un niveau d’énergie élevée ou faible?
Élevée
Propriétés de la lumière (interactions avec object) ?
- Réflexion : L’onde rebondit sur la surface. Donne la couleur aux objets
- Absorption : Énergie de la lumière gardée par l’objet. Lumière émise de nouveau (luminescence ou fluorescence).
- Transmission : Passage de la lumière à travers des objets.
- Diffraction : Déviation ou courbure des rayons lumineux lors de leur passage à travers une ouverture de petite taille. Problème en microscopie car lentilles créer cette effet.
- Réfraction : Changement d’angle de la lumière en fonction de la densité de la matière qu’elle traverse. Problème en microscopie : utilisation de l’huile à immersion comme solution.
Définition résolution (pouvoir de résolution) ?
- Capacité d’une lentille à présenter les objets distinctement, sans chevauchement.
- Liée à la longueur d’onde de la lumière utilisée pour les observations.
Types de microscopes ?
- Microscopes optiques : Utilisent l’énergie du spectre lumineux et des lentilles. (Fond clair ou noir, contraste de phase = lumière visible, à fluorescence et confocal = ultraviolets).
- Microscopes électroniques : Utilisent un faisceau d’électrons et des électroaimants. (À balayage (SEM) et à transmission (TEM)).
Concept de grossissement ?
- Déterminé en multipliant le grossissement des oculaires par celui de l’objectif en place.
- Habituellement de 10X pour microscope optique.
Microscopie à fond clair
- Observation de spécimens frais et contrastés ou morts et colorés.
- Grossissement maximal 1000X (avec huile à immersion).
- Avec microscopes optiques.
Microscopie à fond noir
- Observation de microorganismes vivants (sont invisibles sur fond clair, impossible à colorer).
- Plus faible grossissement.
- Avec microscopes optiques.
Microscopie à contraste de phase
- Observation des structures INTERNES d’organismes vivants (Non fixés ou colorés).
- Augmente le contraste entre structures.
- Avec microscopes optiques.
Microscopie à fluorescence (utilise quoi, quel type de microscopes, noms des éléments) ?
- Fluorescence: capacité à absorber la lumière U.V. et émettre de la lumière visible.
- Utilisation de fluorochromes (substance chimique capable d’émettre de la lumière de fluorescence).
- Avec microscopes optiques.
Éléments :
- Filtre d’excitation : retient la lumière visible et laisse passer les rayons UVs qui “exciteront” les fluorochromes sur le spécimen à observer.
- Filtre d’émission : retient les rayons UVs et laisse passer la lumière visible émise par le fluorochrome.
Microscopie à immunofluorescence (utilise quoi, pour quels bactéries)
- Utilisation d’anticorps associés à des fluorochromes (substance chimique capable d’émettre de la lumière de fluorescence).
- Technique très spécifique : Microorganismes spécifiques (détection de pathogènes) et protéine précise
Microscopie confocale (avec quel type de micrososcopes, utilise quoi)
- Avec microscopes optiques.
- Construction d’images tridimensionnelles (avec ordi), très utile pour étude biofilms.
- Fluorochromes.
- Un laser balai l’échantillon couche par couch.(couche = c = confocale).
Microscopie électronique (idéal pour quel sorte de spécimens, préparation longue ou rapide, utilise lumière ou é ou autre ?)
- Avec microscopes électroniques.
- Idéale pour visualiser des spécimens de moins de 0.2μm (comme virus ou sructures internes bactéries).
- Spécimens non vivants seulement car se font détruirent par é.
- Longue préparation.
- Faisceau d’électrons, pas lumière (donc image en noir et blanc seulement).
- Pas de lentilles de verre, –> électroaimants.
Microscopie électronique à transmission (TEM)
- Avec microscopes électroniques.
- Observation d’échantillons très minces.
- Électrons passent à travers le spécimen puis atteignent le détecteur.
- Grossissement jusqu’à 100 000X.
Microscopie électronique à balayage (SEM)
- Avec microscopes électroniques.
- Donne images des structures externes.
- Électrons du spécimens sont renvoyés vers un capteur.
- Grossissement jusqu’à 10 000X.
Microscopie à force atomique
- Utilise le principe du Braille : sonde se déplace sur surface échantillon. Donc, ni lumière ou électrons.
- Mesure la topographie.
- Grossissement jusqu’à 100 000 000X.
