microbiologia clínica Flashcards
O que é a análise microbiológica?
É a identificação do agente causal de determinada afeção.
Quais os passos da análise microbiológica?
Dia 0- Observação e propagação; Gram, propagação em agar-sangue, MacConkey e BHI.
Dia 1- Isolamento; Observação macro e microscópica das culturas, isolamento em agar-sangue.
Dia 2- Identificação através de testes bioquímicos; Observação macro e microscópica (confirmar a pureza), escolha e realização do teste de identificação.
Dia 3- Leitura dos testes bioquímicos, TSA; Leitura do teste de identificação, teste de sensibilidade a antibióticos.
Dia 4- Leitura do TSA.
Que tipos de colheita existem?
Colheita da amostra se a doença/lesão tiver suspeita de infeção bacteriana. Colher uma amostra biológica apropriada e enviar para o laboratório.
Colheita assética utilizando material estéril. Evitar a contaminação ambiental, pois esta influencia os resultados. Se o transporte for longo a amostra deve ser incluída num meio de conservação, mantendo a viabilidade bacteriana evitando a multiplicação, ou refrigerada a 4ºC. Envio para o laboratório deve ser feito o mais rapidamente possível.
Que informações adicionais se devem incluir no envio para laboratório?
Anamnese e exame clínico, pois diferentes bactérias promovem diferentes padrões lesionais.
Qual é o objetivo do isolamento?
O isolamento realiza-se após a propagação e tem como objetivo individualizar os vários tipos de microrganismos presentes na amostra, a partir de uma cultura mista, e obtenção de uma cultura pura para identificação posterior.
Quais são as estratégias de isolamento?
Técnica específica de sementeira, condições específicas de incubação, inativação em banho-maria, temperatura de incubação específica para diferentes bactérias, alterações da composição do meio.
Qual é a técnica de sementeira utilizada?
Esgotamento por estria em meio sólido para obtenção de colónias isoladas após incubação.
Quais são as condições de incubação?
Estas condições e a composição do meio dependem das características fisiológicas das bactérias a isolar, permitem que o grupo alvo se multiplique.
A sementeira em anaerobiose promove a multiplicação de bactérias anaeróbias facultativas mas inibe as bactérias aeróbias contaminantes. A sua atmosfera de desenvolvimento está ausente de oxigénio. Esta sementeira pode ser realizada em estufas de anaerobiose ou glove box, ou jarras de anaerobiose.
Como se dá a inativação em banho-maria?
Nas bactérias esporuladas há morte das formas vegetativas quando se procede ao banho maria a 80ºC durante 10 minutos.
Os esporos só são inativados após esterilização.
Qual é a temperatura ótima de incubação?
37ºC para bactérias implicadas em processos infeciosos.
Congelação ou refrigeração prolongada da amostra para bactérias resistentes a congelação e refrigeração.
A Salmonella cresce a 42ºC e a Listeria resiste 4 semanas a 4ºC.
Como podemos alterar as composições do meio?
Alterando o pH do meio ou aumentando a concentração de NaCl, meio com pH ácido promove o crescimento de bactérias acidófilas.
Aumentando a concentração de agar ficamos com um meio mais firme e rugoso, o que limita os movimentos das bactérias móveis.
Incorporando antibióticos, sulfamidas ou corantes no meio, diferentes bactérias têm diferentes perfis de sensibilidade.
Recorrendo à filtração por membranas clarificantes.
Caracteriza o meio para bactérias anaeróbias.
Regeneração do meio através da ebulição a 100ºC durante 10 minutos, com arrefecimento rápido para uma completa libertação de oxigénio.
Em meios de cultura com baixo potencial redox adiciona-se substâncias redutoras.
Um indicador de oxigenação é a Resazurina, fica transparente na ausência de oxigénio e vermelho na sua presença.
Nestes meios as necessidades nutricionais são mais exigentes, por isso, utiliza-se fatores de enriquecimento ou de crescimento e nutrientes mais facilmente reduzidos que oxidados.
Quais são as estratégias de isolamento?
Colheita por zaragatoa com carvão ativado ou seringa.
Sementeira por estria por esgotamento.
Incubação a 37ºC durante 48h.
Choque térmico para bactérias esporuladas do género Clostridium.
Meios seletivos.
Prova de ar que consiste na sementeira do mesmo inóculo em atmosfera normal. Isto permite a distinção de bactérias anaeróbias de anaeróbias facultativas.
Que condições têm de se verificar para ocorrer uma identificação correta?
As culturas têm de ser rigorosamente puras.
Observação macroscópica: sementeira através da técnica de esgotamento por estria.
Observação microscópica: coloração Gram.
As culturas devem ser jovens, estando no máximo da sua atividade metabólica.
Culturas em meios ricos, sem fatores seletivos.
Quais são as metodologias para identificação?
Métodos específicos + observações anteriores. Observações preliminares, origem da estirpe e história pregressa.
Observação micro e macroscópica das culturas: coloração Gram e observação a fresco.
Características culturais em meio sólido e líquido.
Outras características como a fluorescência.
Reações bioquímicas através de métodos enzimáticos.
O que são métodos enzimáticos?
Métodos que detetam o equipamento enzimático característico de cada género ou espécie bacteriana.
Baseiam-se na capacidade de degradação de um determinado conjunto de substratos pelo metabolismo bacteriano, consoante as enzimas codificadas pelo DNA de cada espécie.
Se a degradação do substrato implicar a variação de pH do meio temos de observar as variações de cor do indicador. Caso contrário adicionamos indicadores químicos que confirmem a presença ou ausência dos metabolitos finais ou intermediários da ação.
Como podemos concluir acerca do tipo respiratório das bactérias?
Através de testes rápidos que fazem a deteção de enzimas que participam na cadeia respiratória bacteriana.
Através da catalase, enzima que degrada o H2O2 em H2O e O2, com formação de bolhas de gás.
Através da oxidase, deteta a presença da enzima citocromo oxidase, alterando a cor do reagente.
Que escolhas possíveis de galerias bioquímicas existem?
Se as bactérias forem bacilos Gram+ verificamos a presença ou não de esporos. Estas bactérias não necessitam de galeria bioquímica.
Se as bactérias forem cocos Gram- temos de repetir a coloração, pois a sua existência é rara.
Se forem bacilos Gram- realizamos o teste da oxidase. Se for negativo a galeria é API 20 E, se for positivo é API 20 NE.
Se forem cocos Gram+ realizamos o teste da catalase. Se for negativo a galeria é API Strep, se for positivo é API Staph.
Na leitura do perfil de degradação de substratos existem reações de leitura direta e indireta. Explica cada uma.
Nas reações de leitura direta observamos mudanças na cor do meio que são indicadores de pH. A utilização do metabolismo glucídico implica acidificação, enquanto que a utilização do metabolismo proteico implica alcalinização.
As reações de leitura indireta implicam a adição de um reagente que permite a deteção do produto final ou de produtos intermediários do metabolismo bacteriano, através da alteração colorimétrica da suspensão.
Que outros métodos de identificação existem?
Perfil de sensibilidade a antibióticos, sensibilidade a corantes, reações sorológicas, cromatografia de fase gasosa, microscopia eletrónica, tipificação por bacteriófagos.
Para que bactérias está direcionado o perfil de sensibilidade a antibióticos?
Bacilos Gram-negativos anaeróbios estritos.
Não é um antibiograma. Utiliza antibióticos cujo perfil de resistência é característico de géneros ou espécies de bacilos Gram-negativos anaeróbios estritos.
Dê exemplo de uma utilização da sensibilidade a corantes.
Tionina ou fucsina para Brucella.
Em que consistem as reações sorológicas?
Deteção de antigénios específicos presentes na superfície bacteriana (compostos estranhos ao organismo) através da utilização de soros (anticorpos).
Qual é a utilidade da cromatografia de fase gasosa?
Classificação de anaeróbios com base nos seus produtos de metabolismo e perfil de lípidos complexos.
