microbiologia clínica

Question 1

O que é a análise microbiológica?

Answer 1

É a identificação do agente causal de determinada afeção.

Question 2

Quais os passos da análise microbiológica?

Answer 2

Dia 0- Observação e propagação; Gram, propagação em agar-sangue, MacConkey e BHI.
Dia 1- Isolamento; Observação macro e microscópica das culturas, isolamento em agar-sangue.
Dia 2- Identificação através de testes bioquímicos; Observação macro e microscópica (confirmar a pureza), escolha e realização do teste de identificação.
Dia 3- Leitura dos testes bioquímicos, TSA; Leitura do teste de identificação, teste de sensibilidade a antibióticos.
Dia 4- Leitura do TSA.

Question 3

Que tipos de colheita existem?

Answer 3

Colheita da amostra se a doença/lesão tiver suspeita de infeção bacteriana. Colher uma amostra biológica apropriada e enviar para o laboratório.
Colheita assética utilizando material estéril. Evitar a contaminação ambiental, pois esta influencia os resultados. Se o transporte for longo a amostra deve ser incluída num meio de conservação, mantendo a viabilidade bacteriana evitando a multiplicação, ou refrigerada a 4ºC. Envio para o laboratório deve ser feito o mais rapidamente possível.

Question 4

Que informações adicionais se devem incluir no envio para laboratório?

Answer 4

Anamnese e exame clínico, pois diferentes bactérias promovem diferentes padrões lesionais.

Question 5

Qual é o objetivo do isolamento?

Answer 5

O isolamento realiza-se após a propagação e tem como objetivo individualizar os vários tipos de microrganismos presentes na amostra, a partir de uma cultura mista, e obtenção de uma cultura pura para identificação posterior.

Question 6

Quais são as estratégias de isolamento?

Answer 6

Técnica específica de sementeira, condições específicas de incubação, inativação em banho-maria, temperatura de incubação específica para diferentes bactérias, alterações da composição do meio.

Question 7

Qual é a técnica de sementeira utilizada?

Answer 7

Esgotamento por estria em meio sólido para obtenção de colónias isoladas após incubação.

Question 8

Quais são as condições de incubação?

Answer 8

Estas condições e a composição do meio dependem das características fisiológicas das bactérias a isolar, permitem que o grupo alvo se multiplique.
A sementeira em anaerobiose promove a multiplicação de bactérias anaeróbias facultativas mas inibe as bactérias aeróbias contaminantes. A sua atmosfera de desenvolvimento está ausente de oxigénio. Esta sementeira pode ser realizada em estufas de anaerobiose ou glove box, ou jarras de anaerobiose.

Question 9

Como se dá a inativação em banho-maria?

Answer 9

Nas bactérias esporuladas há morte das formas vegetativas quando se procede ao banho maria a 80ºC durante 10 minutos.
Os esporos só são inativados após esterilização.

Question 10

Qual é a temperatura ótima de incubação?

Answer 10

37ºC para bactérias implicadas em processos infeciosos.
Congelação ou refrigeração prolongada da amostra para bactérias resistentes a congelação e refrigeração.
A Salmonella cresce a 42ºC e a Listeria resiste 4 semanas a 4ºC.

Question 11

Como podemos alterar as composições do meio?

Answer 11

Alterando o pH do meio ou aumentando a concentração de NaCl, meio com pH ácido promove o crescimento de bactérias acidófilas.
Aumentando a concentração de agar ficamos com um meio mais firme e rugoso, o que limita os movimentos das bactérias móveis.
Incorporando antibióticos, sulfamidas ou corantes no meio, diferentes bactérias têm diferentes perfis de sensibilidade.
Recorrendo à filtração por membranas clarificantes.

Question 12

Caracteriza o meio para bactérias anaeróbias.

Answer 12

Regeneração do meio através da ebulição a 100ºC durante 10 minutos, com arrefecimento rápido para uma completa libertação de oxigénio.
Em meios de cultura com baixo potencial redox adiciona-se substâncias redutoras.
Um indicador de oxigenação é a Resazurina, fica transparente na ausência de oxigénio e vermelho na sua presença.
Nestes meios as necessidades nutricionais são mais exigentes, por isso, utiliza-se fatores de enriquecimento ou de crescimento e nutrientes mais facilmente reduzidos que oxidados.

Question 13

Quais são as estratégias de isolamento?

Answer 13

Colheita por zaragatoa com carvão ativado ou seringa.
Sementeira por estria por esgotamento.
Incubação a 37ºC durante 48h.
Choque térmico para bactérias esporuladas do género Clostridium.
Meios seletivos.
Prova de ar que consiste na sementeira do mesmo inóculo em atmosfera normal. Isto permite a distinção de bactérias anaeróbias de anaeróbias facultativas.

Question 14

Que condições têm de se verificar para ocorrer uma identificação correta?

Answer 14

As culturas têm de ser rigorosamente puras.
Observação macroscópica: sementeira através da técnica de esgotamento por estria.
Observação microscópica: coloração Gram.
As culturas devem ser jovens, estando no máximo da sua atividade metabólica.
Culturas em meios ricos, sem fatores seletivos.

Question 15

Quais são as metodologias para identificação?

Answer 15

Métodos específicos + observações anteriores. Observações preliminares, origem da estirpe e história pregressa.
Observação micro e macroscópica das culturas: coloração Gram e observação a fresco.
Características culturais em meio sólido e líquido.
Outras características como a fluorescência.
Reações bioquímicas através de métodos enzimáticos.

Question 16

O que são métodos enzimáticos?

Answer 16

Métodos que detetam o equipamento enzimático característico de cada género ou espécie bacteriana.
Baseiam-se na capacidade de degradação de um determinado conjunto de substratos pelo metabolismo bacteriano, consoante as enzimas codificadas pelo DNA de cada espécie.
Se a degradação do substrato implicar a variação de pH do meio temos de observar as variações de cor do indicador. Caso contrário adicionamos indicadores químicos que confirmem a presença ou ausência dos metabolitos finais ou intermediários da ação.

Question 17

Como podemos concluir acerca do tipo respiratório das bactérias?

Answer 17

Através de testes rápidos que fazem a deteção de enzimas que participam na cadeia respiratória bacteriana.
Através da catalase, enzima que degrada o H2O2 em H2O e O2, com formação de bolhas de gás.
Através da oxidase, deteta a presença da enzima citocromo oxidase, alterando a cor do reagente.

Question 18

Que escolhas possíveis de galerias bioquímicas existem?

Answer 18

Se as bactérias forem bacilos Gram+ verificamos a presença ou não de esporos. Estas bactérias não necessitam de galeria bioquímica.
Se as bactérias forem cocos Gram- temos de repetir a coloração, pois a sua existência é rara.
Se forem bacilos Gram- realizamos o teste da oxidase. Se for negativo a galeria é API 20 E, se for positivo é API 20 NE.
Se forem cocos Gram+ realizamos o teste da catalase. Se for negativo a galeria é API Strep, se for positivo é API Staph.

Question 19

Na leitura do perfil de degradação de substratos existem reações de leitura direta e indireta. Explica cada uma.

Answer 19

Nas reações de leitura direta observamos mudanças na cor do meio que são indicadores de pH. A utilização do metabolismo glucídico implica acidificação, enquanto que a utilização do metabolismo proteico implica alcalinização.
As reações de leitura indireta implicam a adição de um reagente que permite a deteção do produto final ou de produtos intermediários do metabolismo bacteriano, através da alteração colorimétrica da suspensão.

Question 20

Que outros métodos de identificação existem?

Answer 20

Perfil de sensibilidade a antibióticos, sensibilidade a corantes, reações sorológicas, cromatografia de fase gasosa, microscopia eletrónica, tipificação por bacteriófagos.

Question 21

Para que bactérias está direcionado o perfil de sensibilidade a antibióticos?

Answer 21

Bacilos Gram-negativos anaeróbios estritos.
Não é um antibiograma. Utiliza antibióticos cujo perfil de resistência é característico de géneros ou espécies de bacilos Gram-negativos anaeróbios estritos.

Question 22

Dê exemplo de uma utilização da sensibilidade a corantes.

Answer 22

Tionina ou fucsina para Brucella.

Question 23

Em que consistem as reações sorológicas?

Answer 23

Deteção de antigénios específicos presentes na superfície bacteriana (compostos estranhos ao organismo) através da utilização de soros (anticorpos).

Question 24

Qual é a utilidade da cromatografia de fase gasosa?

Answer 24

Classificação de anaeróbios com base nos seus produtos de metabolismo e perfil de lípidos complexos.

Question 25

Que informações podemos retirar da microscopia eletrónica?

Answer 25

Informação sobre a morfologia celular.

Question 26

O que são bacteriófagos?

Answer 26

São vírus que infetam as bactérias de um modo específico.

Question 27

Como se faz a identificação de bactérias anaeróbias?

Answer 27

Provas bioquímicas como galerias API 20 A e incubação em anaerobiose.
Cromatografia de fase gasosa, permite uma identificação e quantificação de produtos do metabolismos.
Sensibilidade a antibióticos, com a utilização de antibióticos cuja ação é anulada na ausência de oxigénio.