Méthodes d'étude des cellules et tissu

Question 1

Qu’est-ce qu’une culture cellulaire ?

Answer 1

L’ensemble des techniques utilisées pour faire croître des cellules hors de l’organisme (ex-vivo) ou de leur milieu d’origine

Question 2

En quelle vue est employée la culture cellulaire ?

Answer 2

Elle est employée en vue d’expérimentation scientifique

Question 3

Quels sont les différents comportements en culture selon le type de cellule ?

Answer 3

Les cellules circulantes sont en suspension et sont donc des cellules flottantes dans une phase liquide
Les cellules organisées en tissu sont adhérentes au support

Question 4

Qu’est ce que des cultures primaires ?

Answer 4

C’est une culture de cellules qui ne proliféreront pas indéfiniment, la première culture après prélèvement

Question 5

Expliquer l’importance du milieu de culture

Answer 5

Les cellules primaires sont très sensibles à leur environnement

Question 6

Quels sont les moyens de faire développer les cultures ?

Answer 6

On peut utiliser un facteur de croissance, ou encore une cellule nourricière, c’est-à-dire une couche de cellules qui aidera à la prolifération des cellules d’intérêt par échange de nutriments

Question 7

Qu’est-ce que les lignées cellulaires ?

Answer 7

Ce sont des cellules qui sont ou ont été rendues immortelles

Question 8

Comment les lignées cellulaires sont-elles rendues immortelles ?

Answer 8

Elles sont soit cancéreuses, soit contaminées par un virus ou encore modifiées par un génie génétique

Question 9

Pourquoi les cultures des lignées cellulaires sont-elles considérées comme faciles ?

Answer 9

Elles s’adaptent facilement aux conditions de culture artificielles, en échappant à tout phénomène de sénescence et plus ou moins à l’apoptose

Question 10

Quel est le contrecoup de la facilité des cultures des lignées cellulaires ?

Answer 10

Elles sont exposées au risque de dérivation de souche, posant des problèmes de reproductibilité entre deux laboratoires différents

Question 11

Qu’est ce que la dérivation ?

Answer 11

C’est un phénomène conduit par les erreurs / mutations produites lors de réplication de l’ADN, résultant à des cellules différentes des cellules souches

Question 12

Donner des exemples de mécanismes de la physiologie cellulaire étudiés

Answer 12

Le contrôle du cycle cellulaire, métabolisme, régulation de l’expression des gènes, étude des jonctions cellulaires…

Question 13

Donner des exemples d’emploi des cultures cellulaires en médecine

Answer 13

Elles sont utilisées pour la réalisation de greffes ou d’autogreffes, dans le dépistage des maladies génétiques, dans la thérapie génique…

Question 14

Donner des exemples d’emploi des cultures cellulaires en pharmacologie

Answer 14

Elles sont utilisées dans l’étude pharmacologique et toxicologique de nouveaux médicaments, dans la production de substances à usages thérapeutique, la production de vaccins…

Question 15

Dans quels domaines sont utilisés les anticorps ?

Answer 15

Les anticorps sont utilisés pour détecter l’expression d’une protéine avec le Western Blot, pour localiser une protéine dans un tissu en immunomarquage et pour rechercher des partenaires d’une protéine en immunoprécipitation

Question 16

Qu’est-ce qu’un anticorps ?

Answer 16

C’est une glycoprotéine complexe produite par des plasmocytes en réponse à une stimulation par un antigène, et qui peut se fixer spécifiquement à l’antigène

Question 17

De quoi est composé un anticorps ?

Answer 17

D’une chaine lourde, d’une chaine légère et d’un paratope, le site de liaison à l’antigène

Question 18

Qu’est-ce que l’affinité ?

Answer 18

C’est la force de liaison antigène-anticorps

Question 19

Qu’est-ce que l’épitope ?

Answer 19

C’est le déterminant antigénique

Question 20

Qu’est ce que des anticorps monoclonaux ?

Answer 20

Ce sont des anticorps avec le même paratope et dirigés contre un seul épitope, et qui sont produits par un même clone de plasmocytes

Question 21

Qu’est ce que des anticorps polyclonaux ?

Answer 21

Ce sont des anticorps reconnaissant multiples épitopes d’un même antigène (monospécifique) ou de plusieurs antigènes (polyspécifique)

Question 22

Qu’est-ce que l’immunohistochimie ?

Answer 22

C’est une méthode dans laquelle l’anticorps de révélation est couplé à une enzyme qui convertit un substrat incolore en un produit coloré, permet de détecter une série de molécule sur une seule coupe

Question 23

Qu’est-ce que l’immunofluorescence?

Answer 23

C’est le même principe que l’immunohistochimie sauf que l’anticorps est couplé à un colorant fluorescent et où les observations se feront sur un microscope UV à fluorescence

Question 24

Qu’implique toujours l’immunofluorescence ?

Answer 24

Des anticorps couplés à une molécule fluorescente

Question 25

De quelles manières se fait l’application des anticorps en immunofluorescence ?

Answer 25

De manière directe où l’anticorps est lié à un colorant fluorescent
De manière indirecte où le premier anticorps est révélé par un autre anticorps anti-premier qui, lui, est couplé à un colorant fluorescent

Question 26

En quoi consiste une électrophorèse ?

Answer 26

On pose l’échantillon dans la machine traversée par un champ électrique, les différentes substances vont migrer vers l’anode positive selon leur poids moléculaire

Question 27

Que signifie la position d’une substance par rapport à une autre dans une électrophorèse ?

Answer 27

Plus une molécule migre loin, plus son poids moléculaire est faible

Question 28

Qu’est ce que le transfert après une électrophorèse par SDS-page ?

Answer 28

La fixation des protéines sur une membrane nitrocellulose dont on aura bloqué les sites libres au préalable pour limiter les interactions non spécifiques entre les anticorps et membrane

Question 29

Qu’est-ce que la détection après le transfert ?

Answer 29

On va donc appliquer les anticorps sur la membrane, après incubation et quelques lavages, on révélera la présence des anticorps par autoradiographie

Question 30

Que permet l’immunoprécipitation ?

Answer 30

La détection des partenaires d’une protéine

Question 31

Qu’est-ce que le fractionnement cellulaire ?

Answer 31

Technique d’isolement, ou de purification basée sur le fait que les organites cellulaires ont des densités différentes

Question 32

Quelles sont les étapes du fractionnement cellulaire ?

Answer 32

1) Dissociation et lyse cellulaire
2) Centrifugations
3) Recueil des différents culots
4) Analyse des culots pour identifier les organites

Question 33

Quelles forces subit une particule dans un liquide ?

Answer 33

Son propre poids dirigé vers le bas et la poussée d’Archimède dirigée vers le haut

Question 34

Par quelles caractéristiques les particules sont-elles définies lors de centrifugation ?

Answer 34

Elles sont définies par leur coefficient de sédimentation et par leur densité

Question 35

Comment augmenter l’efficacité des méthodes de séparation ?

Answer 35

En centrifugeant dans des gradients de densité

Question 36

En quoi consiste la centrifugation en gradient de densité ?

Answer 36

La particule s’élève dans le milieu ambiant jusqu’à ce qu’elle atteigne une densité identique à la sienne

Question 37

Comment analyser les différentes fractions pour retrouver les types d’organites ?

Answer 37

En testant, par exemple l’activité enzymatique ou encore par western blot

Question 38

Qu’est-ce qu’une cytométrie de flux ?

Answer 38

C’est une méthode d’analyse automatique de cellules individuelles entrainées par un flux liquide en fonction d’un marqueur, de la taille, granulosité…

Question 39

De quoi est constitué la cytométrie de flux ?

Answer 39

Elle comprend trois parties :
- un réseau fluidique constitué d’une veine liquide s’écoulant à vitesse constante
- un banc optique avec une ou plusieurs sources lumineuses et ses détecteurs
- un microprocesseur qui convertit les signaux électriques en signaux numériques

Question 40

A quoi ressemble le graphe du tri de cellules selon leur composition (qualitative et quantitative) en ADN ?

Answer 40

Super haut pic des cellules en G1 qui rejoint un autre pic plus bas des cellules en G2 et M, et au milieu les cellules en S

Question 41

Comment détecter des protéines intracellulaires ?

Answer 41

On perfore la membrane de petits trous grâce à un détergent puis on utilise des anticorps

Question 42

Comment dégrader la matrice pour des cultures ?

Answer 42

Par digestion enzymatique genre la collagènase

Question 43

Comment décoller les cellules entre elles ?

Answer 43

Grâce à la trypsine et l’EDTA

Question 44

Qu’est ce que la confluence ?

Answer 44

C’est le degré d’écartement entre cellules, plus il est haut, plus les cellules sont proches

Question 45

Qu’induit la confluence à 100% pour les cellules et les lignées cellulaires ?

Answer 45

Lorsque la confluence est à son maximum, les cellules arrêtent de se multiplier entrant dans la phase G0 alors que les lignées cellulaire peuvent continuer à proliférer formant plusieurs couches cellulaires

Question 46

Quelle est la condition préalablement d’une co-immunoprécipitation ?

Answer 46

Il faut faire un lysat dénaturant avec un détergent dénaturant

Question 47

Que permet le Western Blot ?

Answer 47

Il permet de révéler la présence d’un composé et de faire une quantification qualitative (comparaison de quantités pas précise (genre pas 2 fois plus que l’autre))

Question 48

Lorsqu’une mutation code un codon stop prématuré comment est présenté le WB de la protéine mutée ?

Answer 48

Il présente une barre (en plus ou seule de la barre de la protéine normale) en dessous de la masse de la protéine molaire

Question 49

Que nous permet de calculer le WB comportant 2 barres pour une même protéine résultant d’une mutation ?

Answer 49

On peut calculer le nombre d’acides aminés perdus par le codon stop prématuré grâce aux deux mesures de masse de la protéine