Methode: Génération d'anticorps

Question 1

anticorps structure et comment ils sont produits?

Answer 1

• produit par les lymphocytes B
• 2 chaine lourdes et 2 chaines légère identiques et deux site de liasons aux antigène variables

Question 2

que est un épitope?

Answer 2

une région spécifique sur un antigène

Question 3

que est la spécifité d’un anticorps?

Answer 3

chaque anticorps reconnait un épitope précis

Question 4

How do we produce polyclonal antibodies?

Answer 4

1. inject antigène A multiple times into a mammal at different time intervals.
2. take blood of animal which will contain the antibody for the antigène A
3. immunopurification where we purify the blood to obtain the antibodies
4. you obtain a sample of different antibodies that each recognize a particular epitope of the antigène A
   -> def. of polyclonal antibodies

Question 5

how do you produce monoclonal antibodies?

Answer 5

1. inject antigène A multiple times into a mammal at different time intervals.
2. collect B lymphocytes cells and fuse them with myeloma cells to form hybridoma cells.
3. these hybridoma cells are cancerous cells and so will divide uncontrollably and produce clones.
4. you obtain a sample of antibodies that are clones and only recognize one epitope of the antigène A

Question 6

how do you produce secondary antibodies

Answer 6

1. inject antigen A into rabbit for example
2. produce antibodies A against antigen A that you inject into a goat for example
3. the goat’s immune system will produce an antibody B against the foreign antibody A
4. you then mark the antibody B with fluorescence and that is your secondary antibody.

Question 7

how are antibodies used in labs?

Answer 7

as cell markers using:
- Western Blot
- Immunoflurescence
- Immunoprécipitation

Question 8

explain how western blot can be used with secondary antibodies

Answer 8

1. préparation des échantillions
2. Gel SDS-PAGE pour séparer différents protéines
3. Transfert sur membrane de nitrocellulose (protéines dans le gel ne sont pas accesible au anticorps et les membranes nitrocelll. sont solides et souples donc facile a manipuler)
   on pose la protéines d’interêt, soit antigène ou autre, avec anticoprs primaire et secondaire sur la mebrane nitrocell.
4. Incubations d’anticoprs
   anticorps primaire se lie a protéines. anticorps secondaire se lie au primaire.
5. détection (rxn de chémiluminescence)
   la liason des 2 anticrops va crée de la lumière

Question 9

what is immunoprécipation?

Answer 9

• permet de purifier, d’isoler des protéines d’intérêt

1. in a solvant: suitable antibody is added
2. antibody binds to protein of interest
3. add a specifc protein that will bind to the anitbody and make it insoluble
4. centrifugation of solution pellets antibody- protein complex.
5. removal of supernatant and washing

Question 10

what are monobodies

Answer 10

une alternative simple et robuste aux anticorps pour créer des protéines de liasion a leur cible. ils sont synthétique et contiennet juste le site de liason des antibody

Question 11

advantages and disadvantages of monobodies?

Answer 11

advantages: specificité, quantité, peut être exprimer dans les cellules en cultures, pas d’animaux
désavantages: cout élévé

Question 12

what is immunotherapy?

Answer 12

utilisé en association avec les traitements oncologiques traditionells (chimiothérapie, chirugie, etc..)
but: cibler les cellules tumorales reconnues comme étrangères par le système immunitaire.

Produced:
avec cellule du patient, elles sont prgrammés pour exprimer un récepteur antigénique chimérique qui perment la reconnaiscnace et la destruction spécifique des cellules tumorales qui expriment une molécule cible.

taux de succes varie entre patient