Metabolit NPN Flashcards
Senyawa NPN yang diperiksa dan kadarnya
Urea 45%, asam urat 20%, kreatinin 5%, kreatin 1-2%, amoniak 0.2% dan asam amino 20% (Asam amino jarang diperiksa)
Untuk diagnosis apa asam urat diukur?
Diperiksa untuk diagnosis gout. Asam urat tinggi juga ditemukan pada kondisi leukemia, polycythemia, hiperuricemia familial idiopathic, dan kondisi yang berkaitan dengan fungsi ginjal yang turun.
Jalur sintesis yang melibatkan asam urat
Biosintesis purin, biosintesis asam urat
Metode analisis asam urat kimiawi?
Asam fosfotungstat. Bereaksi dengan asam urat menghasilkan allantoin dan tungsten blue. Metode ini nonspesifik dan protein perlu dihilangkan.
Metode enzimatik analisis asam urat uricase
Enzim urikase, menghasilkan allantoin dan CO2 dan H2O2, sangat spesifik. Menghasilkan kromagen merah yang terukur pada absorbansi 520 nm tergantung dengan konsentrasinya.
Metode enzimatik analisis asam urat spektrofotometri
Absorbansi turun saat diukur dengan panjang gelombang 293 nm. Dapat terganggu dengan keberadaan hemoglobin dan xanthine
Metode analisis asam urat enzimatik coupled enzymatic I
Menggunakan katalase, bereaksi dengan asam urat menjadi air dan senyawa berwarna. Biasanya digunakan dalam sistem otomatis dan memiliki negative bias dengan agen pereduksi
metode analisis asam urat enzimatik coupled enzymatic II
Menggunakan peroxidase dan pewarna indikator dan menghasilkan senyawa berwarna dan air. Siste otomatis dan terganggu dengan agen pereduksi
Metode lain analisis asam urat
Isotope dilution mass spectrometry (IDMS), mendeteksi karakteristik fragmen setelah ionisasi, kuantifikasi dengan senyawa yang ditandai dengan isotop. reference method.
Yang harus diperhatikan dalam metode urikase
- Merupakan metode end point (ditunggu sampai semua asam urat bereaksi, baru diukur)
- Spesimen yang digunakan adalah serum darah tidak hemolisis. Asam urat stabil selama 3 hari (suhu 2-8 celsius) dan 6 bulan dalam keadaan beku.
- linieritas metode sampai 25 mg/dL
- Bilirubin dan asam askorbat dapat menyebabkan hasil rendah palsu
- Serum lipemik dapat menyebabkan hasil tinggi palsu
Sintesis kreatinin
Disintesis di hati dari arginin, glisin, dan methionin, dan diubah menjadi kreatin fosfat yang merupakan sumber energi tinggi untuk jaringan otot. Kreatinin adalah produk sisanya, dieksresikan ke plasma dengan laju konstan dan kadarnya berbanding terbalik dengan laju filtrasi glomerulus.
Reaksi Jaffe
Reaksi kreatinin dan picrate, jadi kompleks warna merah-jingga aka kompleks Janovski. (dalam keadaan basa) terabsorpsi pada 510 nm, laju pembentukan warna berbanding lurus dengan kreatinin di sampel.
Metode analisis kreatinin berdasarkan reaksi Jaffe: Jaffe kinetic
Reaksi jaffe dilakukan langsung diatas sampel, pembentukan warna diukur waktunya agar tidak ada gangguan dari kromagen selain kreatinin. Bias positif dari alfa ketoacid dan cephalosporin, perlu alat otomatis agar presisi
Metode analisis kreatinin: reaksi Jaffe dengan adsorben
Kreatinin di filtrat bebas protein di adsorbsikan ke aluminium magnesium silikat lalu direaksikan dengan picrate basa. Adsorben bisa meningkatkan spesifisitas, dulu merupakan reference method
Metode analisis kreatinin: jaffe tanpa adsorben
Kreatinin di filtrat bebas protein bereaksi dengan picrate basa. Bias positif dari asam askorbat/vit. C, glukosa, glutation, alfa ketoacids, asam urat, cephalosporin
Metode lain analisis kreatinin
IDMS; sama kayak yang asam urat; sangat spesifik dan reference method.
Yang harus diperhatikan dalam analisis kreatinin reaksi Jaffe
- reaksi tidak spesifik dan dapat dihasilkan zat lain, bisa meningkat dengan metode initial rate
- spesimen ideal: serum darah tidak hemolisis (kreatinin stabil dalam 1 hari pada suhu 2-8 celsius, beberapa bulan jika beku) atau urine 24 jam yang ditambah asam borat 15 gram
- linearitas sampai 25 mg/dL
- sefalosporin menyebabkan positif palsu
- Asam pikrat oksidator kuat; hindari kontak kulit
Perhitungan creatinine clearance test
Bilirubin
Merupakan produk urai heme, warna kuning. Dapat dalam bentuk terkonjugasi (direct bilirubin) dan tidak terkonjugasi (indirect), beda kelarutannya.
Subform bilirubin
- alfa: tidak konjugasi (27% total)
- beta: monokonjugasi dengan asam glukoronat (24%)
- gamma: dikonjugasi asam glukoronat (13%)
- delta: terikat dengan protein (37%)
- beta, gamma, delta larut air dan merupakan direct bilirubin
- alfa larut dalam alkohol dan yang lain termasuk indirect bilirubin
Metode pengukuran bilirubin: diazotasi Jendrassik-Grof
Asam sulfanilat bereaksi dengan natrium sitrat jadi diazo. Direct bilirubin sama diazo jadi azobilirubin. Intensitas warna sebanding dengan jumlah direct bilirubin; diukur di 550 nm. Kalau bilirubin total pake accelerator untuk lepas ikatan bilirubin dan albumin pake Malloy-Evelyn atau Jendrassik-Grof
Hal yang harus diperhatikan untuk pemeriksaan bilirubin
- spesimen terbaik: serum tidak hemolisis segar (< 2 jam pengambilan) yang terlindung dari sinar matahari. Bilirubin stabil selama 3 bulan jika beku
- Larutan kerja: 1 nitrit d/t + 100 Bt/Bd. di botol coklat gelap dan terhindar matahari
- reaksi warna akan terus turun nilainya jadi inkubasi harus tepat
- serum lipemik atau hemolisis akan blanko
- cahaya matahari menurunkan kadar bilirubin hingga 50% dalam 1 jam.
Urea
NPN terbanyak dalam darah, hasil utama eksresi metabolisme protein. Terbentuk di hati dari gugus amino dan amonia bebas. Penentuan kadar yang diukur adalah urea nitrogen/blood urea nitrogen
Metode analisis enzimatik urea: urease
urea dan air beraksi jadi 2 NH4+ dan CO32-
