MASSON 060224 Flashcards
A quoi sert l’analyse de l’ADN ?
Visualisation
détermine quantité
digestion de cette séquence par enzyme de restriction
clonage
séquencage
A quoi servent les enzymes de restriction ?
Pour clonage et/ou rechercher mutation, polymorphismes sans séquencer
Pour rallonger l’ADN il faut obligatoirement quoi ?
Une fonction hydroxyle disponible, libre
Pour la réplication d’ADN on a besoin d’une ?
ADN polymérase
on parle de “spot” quand ?
Dans analyse en micro-puces ADN
Les puces à ADN c’est pour quoi ?
La transcriptomique et la génomique
Inconvénients des micros puces à ADN ?
Il faut des séquences complémentaires à des séquences connues d’avance ainsi si les mutations, les transcris que l’on cheche à invalider sont méconnus il ya pb
Séquencage au débit combien de génération ?
3
Avec du séquencage au débit on est capable de séquencer quoi ?
L’intégralité des séquences du génome bactérien ou d’exomes
Quel est le facteur limitant du seq haut débit ?
Amplification clonale
Comment détecter l’incorporation d’un nucléotide lors du séquençage ?
Par changement de pH
Dans le séquençage haut débit 3 ème génération le désoxynucléotide comporte quoi ?
Un hexaphosphate sur lequel est fixé un fluorochrome
Exome représente combien de % du génome ?
1,5%
Biologie moléculaire def ?
Etude des molécules d’intérêt biologique
Quelle est la méthode d’amplification la plus populaire ?
PCR
Les grandes étapes de l’analyse de l’ADN ?
Extraction des acides nucléiques
amplification ( PCR, clonage…)
analyse
ADN def ?
Toutes cellules eucaryote possédant un noyau et/ou des mitochondries
Tyoe d’amplification ?
Ciblée = PCR
OU
globale
Les principes généraux de la purification/extraction ?
1 Lyse
2 Précipitation
3 Précipitation
4 Lavages
5 réhydratation et solubilisation
Quelle est l’enzyme qui permet d’amplifier l’ADN et d’en faire des copies ?
ADN polymérase
Caractéristiques PCR ?
- réplications successives
- amplification exponentielle
A quel moment la technique PCR se démocratise car s’automatise ?
Quand il y a développement d’une ADN polymérase résistante aux températures élevées ! TAQ POLYMERASE = “thermus aquaticus”
De quoi à-t-on besoin pour une PCR ?
5 ingrédients
ADN polymérase
Source ADN à amplifier = substrat
Désoxynucléotides
Amorces / primers
MgCl2
Les 3étapes de la PCR ?
Dénaturation 95°
Hybridation 50-60°
Elongation 72°
