Manipulation des acides nucléiques Flashcards
Quels sont les propriétés physico-chimiques utilisées pour purifier les acides nucléiques?
la taille varie avec le nombre de nucléotides, une forte charge négative, structure en double brins
V/F l’ADN est très soluble dans l’eau.
VRai
Pourquoi l’ADN est très soluble dans l’eau?
molécule très chargée, peu de groupements hydrophobes
Avec quoi varie la solubilité de l’ADN?
les conditions salines et/ou la présence de substances organiques
En quoi consiste la précipitation à l’éthanol?
en l’ajout de 2.5 volumes d’éthanol à une solution contenant de l’ADN et 0.25M d’acétate de sodium, mise à -20°C pendant au moins 30 minutes, centrifugation dans une
microcentrifugeuse, des lavages avec de l’éthanol.
Que pouvons nous utiliser d’autre que l’éthanol comme solvant organique pour faire précipité l’ADN?
Isopropanol
L’extraction de l’ADN au phénol est quel type de méthode?
De partition de phase.
Dans l’extraction de l’ADN au phénol où se retrouve les acides nucléiques? Les protéines?
Les acides nucléiques dans la phase aqueuse, les protéines dans le phénol.
Pourquoi dans l’extraction au phénol l’ADN le phénol doit être d’un pH autour de 8?
car l’ADN est partiellement soluble dans le phénol acide.
Quels sont les étapes de l’extractions de l’ADN au phénol?
ajusté à pH autour de 8 du phénol, agiter doucement 1 vol du phénol neutralisé avec 1 vol de la solution contenant de l’ADN, extraire 2 fois le phénol éliminé par extraction avec du chloroforme, le chloroforme est éliminé par précipitation avec de l’éthanol .
V/F les acides nucléiques pénètrent difficilement dans les
gels de polyacrylamide.
Vrai
Pour quelle taille d’acide nucléique utilise-t-on les gel de polyacrylamide?
quelques centaines de nucléotide.
Quel gel utilise-t-on habituellement pour faire migrer l’ADN?
les gels d’agarose.
Pourquoi pour l’électrophorèse sur gel d’agarose utilise-t-on un tampon d’EDTA?
Pour inhiber l’activité des nucléases.
De quoi dépend la migration de l’ADN dans le gel?
de la taille des fragments
