Électrophorèse

Question 1

En quoi consiste l’électrophorèse?

Answer 1

La migration d’un ion dans un champ électrique, est utilisée
dans les séparations analytiques des molécules biologiques.

Question 2

Quel est l’équation de la force électrique?

Answer 2

Félectrique = qE

Question 3

À quoi s’oppose la force électrique?

Answer 3

La force de friction.

Question 4

Quelle est l’équation de la force de friction?

Answer 4

Ffriction = vf

Question 5

La vitesse de déplacement des ions est caractérisée par quoi?

Answer 5

Par une mobilité électrophorétique.

Question 6

Quand est-ce que les protéines possède une mobilité électrophorétique nulle?

Answer 6

À leur point isoélectrique.

Question 7

Qu’est-ce que l’électrophorèse en zone?

Answer 7

Technique dans laquelle l’échantillon est contraint à se déplacer dans une phase solide, comme le papier filtre, la cellulose, ou d’un gel.

Question 8

Qu’est-ce qu’on élimine dans l’électrophorèse en zone?

Answer 8

L’agitation provoquée par la convection, un facteur
limitant du point de vue résolution.

Question 9

En quoi consiste l’électrophorèse sur gel?

Answer 9

La séparation moléculaire est basée non seulement sur la mobilité électrophorètique des molécules, mais aussi sur le principe de filtration sur gel.

Question 10

Quelle technique est parmi les plus puissantes et les plus faciles à utiliser dans la séparation des macromolécules?

Answer 10

L’électrophorèse sur gel.

Question 11

À partir de quoi sont fabriqué les gel de polyacrylamide?

Answer 11

D’une polymérisation radicalaire d’acrylamide et N,N’-méthylènebisacrylamide dans un tampon.

Question 12

Quelles sont les étapes de préparation d’un gel PAGE?

Answer 12

1. le mélange est coulé dans un récipient formé par deux plaques de verres et polymérisera
   en une couche mince de gel
2. les échantillons sont déposés dans des puits
3. le tampon est le même dans les
   réservoirs du haut et du bas
4. un courant continu de 100 à 200 volts parcourt le gel

Question 13

Pourquoi utilise-t-on un pH d’environ 9 pour les tampons de migration?

Answer 13

Pour que toutes les protéines aient une charge négative.

Question 14

Vers quoi les protéines vont migrer lors de l’électrophorèse?

Answer 14

Vers l’anode

Question 15

En fonction de quoi les protéines vont migrer dans le gel?

Answer 15

Selon leur ratio charge/masse.

Question 16

Qu’est-ce que la longueur du gel change dans le processus d’électrophorèse?

Answer 16

Plus le gel est long, meilleure est la finesse des bandes et la résolution.

Question 17

Quelle est la principale différence entre l’électrophorèse sur gel et en pH discontinu?

Answer 17

La présence de deux gel dans le pH discontinu.

Question 18

Quelle est la différence entre les deux gel dans l’électrophorèse en pH discontinu?

Answer 18

Un gel de séparation (running gel), préparé comme le gel précédent.
Un gel de concentration (stacking gel), qui surmonte le gel de séparation et qui est
de plus haute porosité.

Question 19

Quelle est la différences entre les tampons des deux gel dans l’électrophorèse en pH discontinu?

Answer 19

Le tampon du gel de concentration possède un pH ~ 2 unités de moins.

Question 20

Par quoi sont retardée les protéines quand elles entre dans le gel de séparation?

Answer 20

Leur taille, par effet de filtration.

Question 21

Que détermine le gel SDS-PAGE?

Answer 21

La pureté d’une protéine.

Question 22

Le SDS est un détergeant faible ou puissant?

Answer 22

Puissant.

Question 23

Quelle est l’action d’un détergeant?

Answer 23

Par le biais de leurs interactions hydrophobes, sont capables de dénaturer la structure d’une
protéine.

Question 24

À quoi se lie le SDS?

Answer 24

Aux protéines.

Question 25

Quel est le taux de saturation de la liaison SDS-chaîne de polypeptide?

Answer 25

1 molécule de détergent par 2 résidus d’acides aminés.

Question 26

Par apport à quoi calibre-t-on le gel dans l’électrophorèse SDS-PAGE?

Answer 26

Au PM.

Question 27

Quelle type de relation existe-t-il entre la mobilité électrophorétique et le logarithme du poids moléculaire?

Answer 27

Linéaire

Question 28

Quelles est la différence de résolution entre le gel PAGE et SDS-PAGE?

Answer 28

PAGE= faible, SDS-PAGE=excellente

Question 29

Quelles est la différence de migration entre le gel PAGE et SDS-PAGE?

Answer 29

PAGE= ration charge/masse SDS-PAGE= linéaire avec le log de la masse moléculaire des protéines

Question 30

Y a-t-il une dénaturation des complexes protéiques dans le gel PAGE? SDS-PAGE?

Answer 30

PAGE= non SDS-PAGE= oui

Question 31

Y a-t-il une dénaturation des agrégats protéiques dans le gel PAGE? SDS-PAGE?

Answer 31

PAGE= non SDS-PAGE= oui

Question 32

Par quelles méthodes peut-on voir les protéines dans le gel?

Answer 32

• la coloration avec le bleu de Coomassie brillant
• la coloration au nitrate d’argent
• autoradiographie (si les protéines sont marquées avec un isotope
  radioactif)

Question 33

Par quelles méthodes peut-on voir les protéines dans le gel de manière plus spécifique?

Answer 33

Détecter la protéine d’intérêt avec un anticorps qui reconnaît cette protéine -> par immunobuvardage ou “Western blot”.