LP 5

Question 1

Un anticorp (imunoglobulină)

Answer 1

o moleculă de natură proteică, în forma literei Y, produsă în limfocite, capabilă să recunoască o particulă străina de organism (antigen), și să declanșeze o reacție imunologică.

Question 2

Un antigen

Answer 2

substanță străină care pătrunde în corpul uman/animal. Poate include: bacterii, virusuri, ciuperci, alergeni, venin și alte diferite toxine.

Question 3

Un epitop

Answer 3

Regiune localizată pe suprafața unui antigen care este recunoscută de sistemul imunitar, în special celulele B sau T.

Question 4

Toate cele 3 metode (Imunohistochimia, Imunofluorescența,
ELISA) au la bază

Answer 4

Complexul antigen-anticorp
- marcat cu o enzimă:
* IMUNOHISTOCHIMIE;
* ELISA
- marcat cu o substanță fluorescentă
(fluorofori sau fluorocromi) :
* IMUNOFLORESCENȚA

Question 5

Imunohistochimia (IHC)

Answer 5

= metodă pentru detectarea antigenelor virale în țesuturi fixate pe baza complexului antigen-anticorp.
* Complexul antigen-anticorp este marcat cu o enzimă:
- peroxidaza de hrean (HRP)
- fosfataza alcalină- AP)
* Anticorpul este legat de enzimă care în prezența substratului, provoacă o reacție cromogenă

Question 6

Imunohistochimia poate fi:

Answer 6

• DIRECTĂ= antigenul este recunoscut în mod specific de un anticorp primar)
• INDIRECTĂ= la rândul său anticorpul primarul poate fi detectat de un anticorp secundar conjugat, permițând astfel vizualizarea antigenului.

Question 7

ETAPELE DE BAZĂ ALE IHC

Answer 7

1. Fixarea țesuturilor:
2. Includerea în parafină:
3. Deparafinarea:
4. Demascarea antigenului:
5. Permeabilizarea celulară
6. Blocarea
7. Incubarea anticorpului primar
8. Incubarea anticorpului secundar
   *Vizualizarea rezultatelor- microscop optic

Question 8

Anticorpi monoclonali:

Answer 8

• produși de celule B identice care sunt clone dintr-o celulă părinte unică;
• se vor lega doar de un singur tip de epitop.

Question 9

Anticorpii policlonali:

Answer 9

produși de diferite clone de celule B din organism; - recunosc epitopi multipli.

Question 10

Imunofluorescența (IF)

Answer 10

= metodă pentru detectarea antigenelor virale în țesuturi/ culturi celulare infectate pe baza complexului antigen-anticorp.
- Anticorpul este marcat cu o substanță fluorescentă (fluorofori sau fluorocromi) (ex. izotiocianatul de fluoresceină -FITC).

Question 11

Sunt două tipuri de IF:

Answer 11

• directa
• indirecta

Question 12

Cele 4 etape majore ale protocolului imunoflorescenței:

Answer 12

• fixarea, permeabilizarea,
• blocarea,
• incubarea cu anticorpul primar,
• incubarea cu anticorpul secundar pentru I.F. indirectă
• Vizualizare- Microscopul cu imunoflorescență, microscop confocal

Question 13

Testul imunoenzimatic ELISA

Answer 13

= sau testul cu imunosorbent cuplat cu o enzimă constă în determinarea anticorpilor sau a antigenelor dintr-o probă de sânge (ser/plasma).
- complexul antigen-anticorp este marcat cu o enzimă (peroxidaza de hrean- HRP sau fosfataza alcalină - AP)
- ELISA este de obicei efectuată în plăci cu 96 sau 384 godeuri.

Question 14

Principiul de bază

Answer 14

• Fixarea atg sau a atc pe un suport solid (plăci ELISA);
• Cuplarea elementului fixat în plcăcile ELISA (ATG/ATC) cu elementul de identificat din proba de testat ;
• Evidențierea complexului atg-atc;
• Adăugarea substratului specific enzimei.

Question 15

Tipuri de ELISA

Answer 15

• ELISA directă;
• ELISA indirectă;
• ELISA Sandwich;
• ELISA de inhibiție sau competitivă

Question 16

ELISA – Intepretarea datelor

Answer 16

1. Cantitativ:
2. Calitativ:
3. Semi-cantitativ: