Les appareils de photométrie

Question 1

Quelle est la signification de faisceau unique?

Answer 1

Un seul espace de mesure

Question 2

Quelle est la signfication de monocellulaire?

Answer 2

Un seul détecteur

Question 3

Expliquez le trajet de la lumière avec le spectrophotomètre à faisceau unique monocellulaire

Answer 3

*La source lumineuse émet de la lumière blanche qui arrive au monochromateur où la longueur d’onde est sélectionnée
*La lumière monochromatique arrive à l’échantillon
*Elle est absorbée en partie et la lumière transmise arrive au détecteur
*Le détecteur transforme le signal lumineux en signal électrique
*Le lecteur affiche le résultat

Question 4

Que nécessite le spectrophotomètre à faisceau unique monocellulaire?

Answer 4

Exige un calibrage à l’aide d’une solution de référence suivie de la mesure de l’échantillon

Question 5

Le spectrophotomètre à faisceau unique monocellulaire nécessite un calibrage fréquent pour compenser pour deux choses, lesquelles?

Answer 5

*Compenser les variations possibles de l’inteisté lumineuse de la source
*Compenser les variations d’absorption dans le temps de la solution de référence

Question 6

Quel type de mesure peut-on faire avec les spectrophotomètres à faisceau unique monocellulaire?

Answer 6

Mesures instantanées (ex. protéines sériques totales, glucose, créatinine)

Question 7

Quel type de mesure ne doit-on pas faire avec les spectrophotomètres à faisceau unique monocellulaire?

Answer 7

Lectures en continu (ex. lectures de réactions/activités enzymatiques)

Question 8

Expliquez le trajet de la lumière dans le spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire

Answer 8

*La lumière blanche part de la soucre lumineuse vers le monochromateur
*La lumière monochromatique arrive au séparateur où le faisceau lumineux est divisé en deux
*Une partie frappe la cuvette de référence et l’autre partie éclaire la cuvette de l’échantillon
*Chaque lumière transmise est captée par un détecteur
*Les deux signaux électriques sont comparés électroniquement puis le lecture affiche le résultat

Question 9

Quels sont les avantages du spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire?

Answer 9

Corrige les variations d’absorption dans le temps de la solution de référence

Question 10

Quels sont les désavantages du spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire?

Answer 10

*Différence de sensibilité entre les deux détecteurs
*Éclairage moins intense (faiscerau lumineux divisé en deux)

Question 11

Quel type de mesure peut-on effecturer avec le spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire?

Answer 11

*Mesures instantanées
*Mesures en continu

Question 12

Quelles sont les caractéristiques générales d’un spectrophotomètre fonctionnant dans le visible?

Answer 12

*À faisceau unique
*Longueurs d’ondes de 400 à 700 nm
*Lampe à inscandescence
*Monochromateur à réseau de diffraction
*Détecteur à tube photomultiplicateur
*Usages: mesures instantanées
*Méthodes directes et indirectes

Question 13

Quelles sont les caractéristiques générales d’un spectrophotomètre fonctionnant dans le visible et l’UV?

Answer 13

*À faisceau double
*Longueurs d’ondes de 190 à 1000 nm
*Lampe à inscandescence et à décharges électriques dans un gaz
*Monochromateur à prisme de quartz
*Détecteur à tube photomultiplicateur
*Usages: mesures instantanées et mesures en continu
*Méthodes directes et indirectes

Question 14

Que signifie méthode directe de mesure avec un spectrophotomètre?

Answer 14

La substance elle-même est mesurée

Question 15

Que signifie méthode indirecte de mesure avec un spectrophotomètre?

Answer 15

La substance réagit avec un réactif et la coloration est mesurée

Question 16

Quelle est la procédure d’utilisation des appareils de photométrie d’absorption?

Answer 16

*Mettre l’appareil en fonction
*Sélectionner la longueur d’onde
*Laisser une période de réchauffement de 10 à 15 minutes à la lampe pour qu’elle atteigne son intensité maximale et stable
*Calibrer le spectrophotomètre (absorbance à 0 avec le blanc)
*Mesure des échantillons

Question 17

À quels moments doit-on faire le blanc du spectrophotomètre?

Answer 17

À chaque fois que la longueur d’onde est changée

Question 18

Qu’est-ce qu’il faut vérifier pour l’entretien des spectrophotomètres?

Answer 18

*Vérifier périodiquement l’exactitude de l’indication de la longueur d’onde
*Vérifier à l’occasion la linéarité de la réponse photométrique

Question 19

Quelles sont les précautions à prendre lors de l’entretien des appareils de photométrie d’absorption?

Answer 19

*Ne pas découvrir inutilement les parties optiques afin d’éviter les dépôts de poussière
*Le tube photomultiplicateur ne doit jamais être exposé à la lumière du jour lorsqu’il fonctionne
*Les difficultés majeures doivent être confiées à des spécialistes en réparation

Question 20

Expliquez le principe d’un appareil de photométrie d’émission (fluorimètre).

Answer 20

*Utilise un faiscau lumineux de courte longueur d’onde (UV ou court visible) comme énergie excitatrice
*Certaines molécules excitées situées à des niveaux de vibrations élevés de l’état excité perdent de petites quantités d’énergie par chocs
*Elles descendent au niveau le plus bas de l’état excité
*Puis, elles descendent au niveau intermédiaire de l’état stable et c’est à ce moment qu’elles émettent une quantité d’énergie lumineuse moindre que l’énergie excitatrice et de longueur d’onde supérieure (dans le visible)
*Mesure de l’intensité de la fluorescence qui est proportionnelle à la concentration de la substance étudiée
*Calibration par étalonnage

Question 21

Quelles sont les composantes d’un fluorimètre?

Answer 21

*Lampe à décharges électriques dans un gaz (xénon)
*Filtre primaire
*Filtre secondaire
*Détecteur
*Lecteur

Question 22

Quel type de lampe retrouve-t-on dans un fluorimètre?

Answer 22

Lampe à décharges électriques dans un gaz (xénon)

Question 23

Pour quelles à raisons utilise-t-on une lampe à décharges électriques dans un gaz dans un fluorimètre?

Answer 23

*Spectre continu
*200 à 1000 nm
*Lumière de grande intensité

Question 24

Quel est le rôle de la lampe dans un fluorimètre ?

Answer 24

Fournier une source d’énergie lumineuse/excitatrice (entre 200 et 400 nm)

Question 25

Quel est le rôle du filtre primaire dans un fluorimètre?

Answer 25

Sélectionner seulement les longueurs d’onde excitatrice (entre 200 et 400 nm)

Question 26

Quel type de cuvettes utilise-t-on en fluorimétrie?

Answer 26

*Quartz (mais éclairé par des UV, elles émettent elles-même de la fluorescence
*Plastique (préférable)

Question 27

Que se passe-t-il lorsque la lumière excitatrice frappe l’échantillon dans la photométrie d’émission?

Answer 27

Émet de la fluorescence

Question 28

Qu’en est-il de la lumière transmise en fluorimétrie et pourquoi?

Answer 28

On ne s’en préoccupe pas, car la lecture est faite à 90 degrés

Question 29

Quel est le rôle du filtre secondaire en fluorimétrie?

Answer 29

Laisse passer seulement la fluorescence émise par l’échantillon

Question 30

Pourquoi le filtre secondaire est-il placé à 90 degrés par rapport à la lumière excitatrice en fluorimétrie?

Answer 30

Pour ne pas avoir de lumière parasite

Question 31

Quelle est la particularité du fluorimètre?

Answer 31

*Grande spécificité
*Grande sensibilité
*1000x plus que le spectrophotomètre

Question 32

Quels sont les recommandations d’entretien d’un fluorimètre?

Answer 32

*Nettoyage régulier du compartiment de mesure
*Nettoyer les filtres à l’aide de papier à lentille
*Entreposer les filtres dans un coffret spécial