Les appareils de photométrie Flashcards
Quelle est la signification de faisceau unique?
Un seul espace de mesure
Quelle est la signfication de monocellulaire?
Un seul détecteur
Expliquez le trajet de la lumière avec le spectrophotomètre à faisceau unique monocellulaire
*La source lumineuse émet de la lumière blanche qui arrive au monochromateur où la longueur d’onde est sélectionnée
*La lumière monochromatique arrive à l’échantillon
*Elle est absorbée en partie et la lumière transmise arrive au détecteur
*Le détecteur transforme le signal lumineux en signal électrique
*Le lecteur affiche le résultat
Que nécessite le spectrophotomètre à faisceau unique monocellulaire?
Exige un calibrage à l’aide d’une solution de référence suivie de la mesure de l’échantillon
Le spectrophotomètre à faisceau unique monocellulaire nécessite un calibrage fréquent pour compenser pour deux choses, lesquelles?
*Compenser les variations possibles de l’inteisté lumineuse de la source
*Compenser les variations d’absorption dans le temps de la solution de référence
Quel type de mesure peut-on faire avec les spectrophotomètres à faisceau unique monocellulaire?
Mesures instantanées (ex. protéines sériques totales, glucose, créatinine)
Quel type de mesure ne doit-on pas faire avec les spectrophotomètres à faisceau unique monocellulaire?
Lectures en continu (ex. lectures de réactions/activités enzymatiques)
Expliquez le trajet de la lumière dans le spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire
*La lumière blanche part de la soucre lumineuse vers le monochromateur
*La lumière monochromatique arrive au séparateur où le faisceau lumineux est divisé en deux
*Une partie frappe la cuvette de référence et l’autre partie éclaire la cuvette de l’échantillon
*Chaque lumière transmise est captée par un détecteur
*Les deux signaux électriques sont comparés électroniquement puis le lecture affiche le résultat
Quels sont les avantages du spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire?
Corrige les variations d’absorption dans le temps de la solution de référence
Quels sont les désavantages du spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire?
*Différence de sensibilité entre les deux détecteurs
*Éclairage moins intense (faiscerau lumineux divisé en deux)
Quel type de mesure peut-on effecturer avec le spectrophotomètre à double faisceau bicellulaire?
*Mesures instantanées
*Mesures en continu
Quelles sont les caractéristiques générales d’un spectrophotomètre fonctionnant dans le visible?
*À faisceau unique
*Longueurs d’ondes de 400 à 700 nm
*Lampe à inscandescence
*Monochromateur à réseau de diffraction
*Détecteur à tube photomultiplicateur
*Usages: mesures instantanées
*Méthodes directes et indirectes
Quelles sont les caractéristiques générales d’un spectrophotomètre fonctionnant dans le visible et l’UV?
*À faisceau double
*Longueurs d’ondes de 190 à 1000 nm
*Lampe à inscandescence et à décharges électriques dans un gaz
*Monochromateur à prisme de quartz
*Détecteur à tube photomultiplicateur
*Usages: mesures instantanées et mesures en continu
*Méthodes directes et indirectes
Que signifie méthode directe de mesure avec un spectrophotomètre?
La substance elle-même est mesurée
Que signifie méthode indirecte de mesure avec un spectrophotomètre?
La substance réagit avec un réactif et la coloration est mesurée
Quelle est la procédure d’utilisation des appareils de photométrie d’absorption?
*Mettre l’appareil en fonction
*Sélectionner la longueur d’onde
*Laisser une période de réchauffement de 10 à 15 minutes à la lampe pour qu’elle atteigne son intensité maximale et stable
*Calibrer le spectrophotomètre (absorbance à 0 avec le blanc)
*Mesure des échantillons
À quels moments doit-on faire le blanc du spectrophotomètre?
À chaque fois que la longueur d’onde est changée
Qu’est-ce qu’il faut vérifier pour l’entretien des spectrophotomètres?
*Vérifier périodiquement l’exactitude de l’indication de la longueur d’onde
*Vérifier à l’occasion la linéarité de la réponse photométrique
Quelles sont les précautions à prendre lors de l’entretien des appareils de photométrie d’absorption?
*Ne pas découvrir inutilement les parties optiques afin d’éviter les dépôts de poussière
*Le tube photomultiplicateur ne doit jamais être exposé à la lumière du jour lorsqu’il fonctionne
*Les difficultés majeures doivent être confiées à des spécialistes en réparation
Expliquez le principe d’un appareil de photométrie d’émission (fluorimètre).
*Utilise un faiscau lumineux de courte longueur d’onde (UV ou court visible) comme énergie excitatrice
*Certaines molécules excitées situées à des niveaux de vibrations élevés de l’état excité perdent de petites quantités d’énergie par chocs
*Elles descendent au niveau le plus bas de l’état excité
*Puis, elles descendent au niveau intermédiaire de l’état stable et c’est à ce moment qu’elles émettent une quantité d’énergie lumineuse moindre que l’énergie excitatrice et de longueur d’onde supérieure (dans le visible)
*Mesure de l’intensité de la fluorescence qui est proportionnelle à la concentration de la substance étudiée
*Calibration par étalonnage
Quelles sont les composantes d’un fluorimètre?
*Lampe à décharges électriques dans un gaz (xénon)
*Filtre primaire
*Filtre secondaire
*Détecteur
*Lecteur
Quel type de lampe retrouve-t-on dans un fluorimètre?
Lampe à décharges électriques dans un gaz (xénon)
Pour quelles à raisons utilise-t-on une lampe à décharges électriques dans un gaz dans un fluorimètre?
*Spectre continu
*200 à 1000 nm
*Lumière de grande intensité
Quel est le rôle de la lampe dans un fluorimètre ?
Fournier une source d’énergie lumineuse/excitatrice (entre 200 et 400 nm)
Quel est le rôle du filtre primaire dans un fluorimètre?
Sélectionner seulement les longueurs d’onde excitatrice (entre 200 et 400 nm)
Quel type de cuvettes utilise-t-on en fluorimétrie?
*Quartz (mais éclairé par des UV, elles émettent elles-même de la fluorescence
*Plastique (préférable)
Que se passe-t-il lorsque la lumière excitatrice frappe l’échantillon dans la photométrie d’émission?
Émet de la fluorescence
Qu’en est-il de la lumière transmise en fluorimétrie et pourquoi?
On ne s’en préoccupe pas, car la lecture est faite à 90 degrés
Quel est le rôle du filtre secondaire en fluorimétrie?
Laisse passer seulement la fluorescence émise par l’échantillon
Pourquoi le filtre secondaire est-il placé à 90 degrés par rapport à la lumière excitatrice en fluorimétrie?
Pour ne pas avoir de lumière parasite
Quelle est la particularité du fluorimètre?
*Grande spécificité
*Grande sensibilité
*1000x plus que le spectrophotomètre
Quels sont les recommandations d’entretien d’un fluorimètre?
*Nettoyage régulier du compartiment de mesure
*Nettoyer les filtres à l’aide de papier à lentille
*Entreposer les filtres dans un coffret spécial
