La culture cellulaire Flashcards
Besoins nutritifs pour tous types le cellules
SAV (service après vente) Sel sucres vitamines acide aminés (=milieu commerciaux de base)
Besoins nutritifs pour cellules eucaryotes
VACOSS
- sels minéraux (Na, Cl, K, P, Mg …»_space; maintien Potentiel mbnR , maintien de la balance Osmotique , cofacteur des Réaction biochimique (POR))
- sucres (sucre en C6»_space; apport NRJ)
- Oligo-éléments (fer, zinc …)
- Acides aminés (»_space; croissance cellulaires)
- vitamines (»_space; vitB, biotine, acide folique, nicotinamide
- choline, inositol
Apports du sérum de veau fœtal
SAC-T(hlm
- Sels minéraux, nutiments, oligo-éléments, vitamines, cholestérol, acide gras
- Facteurs d’Attachement : laminine, fibronectine
- Hormones et facteurs de Croissance : insuline, PDGF, EGF, FGF (fin tjs GF + PD(e)F )
- Protéines diverses pour le Transport des Hormones, Lipides et Minéraux
Avantages du sérum de veau foetal
- agent mitogène important
- protection contre paramètres physiques (choc, viscosité, osmolarité)
- protection contre paramètre chimiques ( ex : inhibiteurs de protéases)
Inconvénient sérum de veau foetal
- composition pas bien déterminée
- variabilité
- difficile d’approvisionnement
- possibilité de présence de virus et autres pathogènes
- présence d’immunoglobuline
Composants de la matrice extra-cellulaire
G Pas Cpris La Faille
- glycosaminoglycane
- protéoglycane
- collagène
- laminine
- fibronectine
Besoins cellulaires physiologiques :
- qL T° ?
- qL pH ?
- taux de CO2
- tampon (but et en présence de quoi ?)
- avc quoi est ajustée l’osmolarité ?
- taux d’humidité et pk humidité ?
- 37°C
- 7,2 < pH < 7,4
- 5% CO2 ( et aussi besoin de bicarbonate)
- en présence d’HEPES , évite brusques variations de pH
- Na et Cl ( osmolarité )
- humidité : 90-95% , évite variations de pressions osmotiques dû à l’évaporation de l’eau
Equilibre bicarbonate/acide carbonique obtenu avec le CO2 en phase … ?
Equilibre bicarbonate/acide carbonique obtenu avec le CO2 en phase GAZEUSE
expl de cellules en suspensions
cellules sanguines
expl de cellules adhérentes
fibroblastes
majorité des cellules sont adhérentes
nature du support utilisé pour l’adhérence in vitro ?
chargé négativement !!
en général plastique ou polystyrène qu’on traite pour que charges négatives
méthodes de clonage (2)
- clonage par micromanipulation à partir de colonies
obtenues en milieu semi solide - clonage par dilution limite
modes de séparation cellulaire
(SES) game
- Séparation sur des paramètres physiques
»_space; gradient de densité
»_space; adhérence
- Séparation à l’aide de marqueurs spécifiques
- Enrichissement d’une population à l’aide de facteurs de croissance spécifiques
Caractéristiques des cellules pérennisées (4)
- Cellules qui se divisent indéfiniment
- pouvoir multiplicatif important
- Peuvent avoir un nombre de chromosomes anormal
(souvent hétéroploïdie) - Morphologie souvent différente des cellules normales
Comment on obtient une lignée pérennisée ? (4)
- événement spontané à partir de culture primR (rare)
- prélèvement d’une tumeur (cellules tumorales sont pérennisées)
- hybridation de cellules (ex:hybrydome)
- induction par de virus transformants (EBV ou SV40), agents physiques ou chimiques
