Kromatografi Flashcards
Forklar det grunnleggende prinsippet bak kromatografi. Kom med eksempler på anvendelser innen medisinske analyser.
Kromatografi er en fellesbetegnelse for en gruppe separasjons- og analysemetoder som baserer seg på at stoffene som skal separeres skiller seg som følge av deres kjemiske og fysiske egenskaper. Baserer seg på det prinsipp at stoffene som skal separeres fordeler seg mellom to faser, hvor den ene fasen er mobil (MF) og den andre er stasjonær (SF).
Eksempel: Legemidler, rusmidler, toksiner, hormoner, dopingkontroll
Kromatografi kan brukes både kvalitativt og kvantitativt. Forklar hvorfor.
Kvalitativ- Bruker retensjonstid til identifikasjon av spesifikke analytter. Ved bruk av kjente referanser kan man på denne måten analysere en ukjent blanding, og avgjøre om stoffet er til stede eller ikke.
Kvantitativt - Baserer seg på sammenhengen mellom mengde stoff som passerer detektoren og detektorens respons for denne stoffmengden. Ved bruk av en kalibreringskurve med kjente konsentrasjoner kan man bestemme mengde.
Forklar hva som menes med mobilfase og stasjonærfase.
Mobilfase - Beveger seg. En væske eller gass som transporterer prøvekomponentene over den stasjonære fasen.
Stasjonærefase - Står stille. F.eks et porøst materiale/væske, enten som en film på ei plate eller pakket i / belegg på innsiden av en kolonne. Består av stillestående partikler som har til oppgave å «holde igjen» analyttene.
Forklar hovedforskjellene mellom HPLC og GC.
HPLC - Væskekromatografi. Mobilfasen er en væske. Bruker kolonner som inneholder små partikler som stasjonærfase. Krever høyt trykk for å skyve komponentene gjennom kolonnen.
Prinsipp: Separerer etter polaritet og/eller størrelse.
GC - Gasskromatografi. Mobilfasen er en gass. Analyserer stoffer med lavt kokepunkt (går enkelt over i dampform).
Prinsipp: Separasjon etter kokepunkt.
Hvorfor er det viktig med prøveopparbeidelse innen kromatografi?
Kan inneholde komponenter som ødelegger separasjonssystemet, og det er derfor viktig å rense prøven.
Kan inneholde komponenter som interferer med det aktuelle stoffet i analysen.
Konsentrasjonen kan være så lav at den ikke blir detektert, og må derfor oppkonsentreres.
På hvilken måte kan man si noe om en kolonnes effektivitet?
Kolonneffektivitet handler om hvor godt kolonnen greier å separere to stoffer som er nesten like.
Tre faktorer: Platetall (N), platehøyde (H) og kolonnelengde (L)
Platetall - En region av kolonnen med perfekt likevekt mellom MF og SF. Handler om kolonnens evne til å gi smale bånd.
Platehøyde - Defineres som den delen av kolonnen som utgjør en teoretisk plate.
H = L / N (kolonnens lengde / antall plater)
For å gi best mulig separasjon bør platehøyden (H) være minst mulig, og platetallet (N) størst mulig.
Vi kan skille mellom seks ulike separasjonsprinsipp innen kromatografi. Hvilke?
- Fordelingskromatografi
- Adsorpsjonskromatografi
- Ionebytte-kromatografi
- Størrelseseksklusjons-kromatografi (gel)
- Affinitetskromatografi
- Kiralkromatografi
Forklar hvordan endrede separasjonsbetingelser vil virke inn på den
kromatografiske separasjonen.
Retensjon og resolusjon påvirkes av: temperatur, pH, trykk, sammensetning av MF/SF, tilsetning av salter
Ved økning av temperatur kan det redusere viskositeten til løsemiddelet og øke diffusjonshastigheten til molekylene. Dette kan føre til en raskere separasjon.
Matriks – Forbindelser som kan interfere eller ødelegge for analysen (salter).
Hva betyr FID? Hvordan fungerer dette?
Flame Ionization Detector
Hvilke hovedkomponenter består HPLC av?
- Løsemiddelreservoar (MF)
- Pumpeenhet
- Injektor
- Kolonneovn
- Kolonne
- Detektor
- Datasystem
Hva er en purge-ventil?
Purge-ventil er en del av pumpeenheten til HPLC. Brukes til å pumpe mobilfasen gjennom hele systemet, utenom kolonnen. Dette gjøres for å bli kvitt luftbobler, eller for å skifte ut MF.
Hva vil det si at HPLC har omvendt-fase?
I normal fase er den stasjonære fasen polar, og den mobile fasen upolar. I omvendt-fase er den stasjonære fasen upolar, og den mobile fasen polar. Basert på prinsippet “likt løser likt” vil upolare stoffer derfor vandre raskere gjennom den stasjonære fasen (?).
Hva er hensikten med intern og ekstern standard?
Intern standard - En kjent prøvemengde som tilsettes prøven før analysering. Brukes til å korrigere for tap ved opparbeidelse.
Ekstern standard - Kalibrator med kjent konsentrasjon. Analyseres sammen med prøvene, og resultatene brukes til å lage en kalibreringskurve.
