Elektroforese Flashcards
Hva er elektroforese?
Biokjemisk separasjonsmetode. Separasjon av ladede komponenter/partikler i en løsning under påvirkning av et elektrisk felt.
F.eks separasjon av proteiner/nukleinsyrer.
Forklar prinsippet bak elektroforese.
Ved f.eks separasjon av DNA vil aminosyrene være negativt ladet. Det elektriske feltet består av en positiv og en negativ pol. Som følge av den negative ladningen vil det elektriske feltet påvirke aminosyrene til å vandre mot den positive polen.
Elektroforese bruker en gel med ulik sammensetning, som komponentene kan vandre gjennom. Porer i gelen vil hindre ulike komponenter i ulik grad. Små komponenter vil vandre raskere gjennom gelen enn store. På denne måten blir komponentene separert basert på størrelse.
Beskriv kort noen momenter som kan påvirke vandring under elektroforesen.
pH påvirker amfolytters ladning. Ved lav pH vil de stort sett være positivt ladet, og ved høy pH negativt ladet. Ved lav pH vil derfor amfolyttene vandre mot den positive polen, og omvendt.
Molekylstørrelse - Porer i gelen påvirker vandringshastigheten. Mindre molekyler vandrer raskere enn store.
Temperatur - Økt temperatur vil føre til raskere vandringshastighet.
Styrket på det elektriske feltet - Høyere styrke fører til raskere vandring.
Støttemediets egenskaper - Porestørrelse påvirker vandringshastigheten.
Forklar hvordan isolektrisk fokusering foregår.
Kjemisk analysemetode som skiller stoffer basert på ladning. Utnytter molekylenes isoelektriske punkt, dvs. den pH-en hvor molekylet er elektrisk nøytralt.
pHen varierer langs vandringsbanen, og etter hvert som molekylene når pHen hvor de har sitt isoelektriske punkt, vil de stoppe. På denne måten kan molekylene separeres etter ladning.
Kan brukes til å separere proteiner bare skiller seg fra hverandre ved ladningen på én av aminosyrene.
Hva er forskjellen på “denaturert” og “native” elektroforese?
Native - Elektroforese utføres på proteiner i deres naturlige form. Separasjonen skjer da på grunnlag av ladning/masse-ratio.
Denaturert - Proteinene er denaturert før elektroforesen, noe som gjør at alle proteinene får lik ladning. Separasjonen skjer på grunnlag av størrelse.
