Automatisert fotometri

Question 1

Kan gjøre rede for hva bikromasi er, og hensikten med det.

Answer 1

Bikromasi er fotometrisk avlesning ved to ulike bølgelengder samtidig, hvor det måles en primærbølgelengde og en sekundærbølgelengde. Finnes ved hjelp av et bølgelengdescan.

Primær bølgelengde - Maksimal absorbans
Sekundær bølgelengde - lager en «grunnlinje» og korrigerer for interferens. Skal ha lavest mulig absorbans

Bruk av to ulike bølgelengder kan bidra til å korrigere for eventuelle forstyrrelser eller bakgrunnsabsorpsjon som kan påvirke nøyaktigheten av målingene.

Question 2

Hva er de fire ulike metodene for automatisert fotometri? Gi ett eksempel på hver av disse.

Answer 2

1. Ikke-enzymkatalyserte konsentrasjonsmålinger (salisylat)
2. Enzymkatalyserte konsentrasjonsmålinger (kolesterol)
3. Enzymaktivitetsmålinger (LDH)
4. Immunologiske konsentrasjonsmålinger

Question 3

Beskriv hvordan fotometri i automatiserte instrumenter er bygd for å kunne måle flere bølgelengder på en gang.

Answer 3

Eksempel: Pentra C400.

Sender inn hvitt lys - dvs mange ulike bølgelengder. Pentra har mange deteksjonsenheter (fotodioder) i gitte posisjoner som detekterer spesifikke bølgelengder. På denne måten måles lys med ulike bølgelengder samtidig.

Question 4

Pentra jobber i 12-sekunderssykluser. Hvordan fungerer dette?

Answer 4

Instrumentet starter med en reagensarm som avsetter reagens i kuvetta fra sekund 1. Samtidig vil reagenssprøyta avgi reagenset. Ca. ved sekund 3 så tas det opp prøve fra prøvearmen, og ved ca. sekund 6 så avsettes prøven. Så fort prøven er avsatt begynner omrøringspinnen å blande prøve og reagens helt fram til ca. sekund 10. Når blandinga er ferdig, like etter sekund 10, starter avlesningen. Samtidig som avlesningen foregår gjør instrumentet seg klar til en ny syklus.

Question 5

Hvordan er spektrofotometeret i Pentra C400 oppbygd?

Answer 5

1. Tungsten-halogen-lampe (lyskilde)
2. Kondenseringslinse
3. Foldet speil og shaping lens
4. Prøveholder / kyvette
5. Samlingslinse
6. Konkavt reflekterende rist
7. Fotodiodegruppe

Question 6

Hvilke ulike kalibreringsmetoder finnes på Pentra?

Answer 6

1. Faktor (teoretisk beregnet)
2. Slope avarage (1-3 kal)
3. Lineær regresjon (2-8 kal)
4. Lineær interpolasjon
5. Matematisk multiparameter-logaritmer

Question 7

Hva er hensikten med reagensblank? Hva må man tenke på når man skal beregne konsentrasjon?

Answer 7

Reagensblank er en løsning som kun inneholder reagenset, og brukes til å korrigere for reagenset egenfarge.

Ved nullstilling / autozero kan man beregne konsentrasjon som normalt. Uten nullstilling skal absorbansen til reagensblank trekkes fra ved beregning.