Fotometri Flashcards
Kan forklare prinsippet for fotometri.
Brukes til mengdebestemmelse av stoffer basert på deres absorpsjon av synlig lys og UV-lys. Et fotometer uttrykker absorpsjonen som forskjellen i intensiteten til lyset før og etter det har passert gjennom prøven.
Forklar anvendelse av Beers lov.
Fotometri er basert på Beers lov som sier at mengden lys absorbert i et stoff oppløst i en ikke-absorberende løsning er direkte proporsjonal med konsentrasjonen til stoffet og lengde på lysveien i cm. Gjelder kun for monokromatisk lys.
Forklar det kjemiske reaksjonsprinsippene for kolesterol. Herunder bl.a. type reaksjon, analyse og kalibrering
Enzymkatalysert, kolorimetrisk metode
Endepunktsanalyse
Kalibreringsmetode: Slope avarage
Forklar det kjemiske reaksjonsprinsippene for salisylat.
Ikke-enzymkatalysert
Endepunktsavlesning
Kalibrering: Slope avarage (?)
Forklar det kjemiske reaksjonsprinsippet til LDH.
Enzymaktivitetsmåling
Kinetisk metode
Kalibrering: Slope avarage
Forklar forholdet mellom transmisjon og absorbans. Hvordan kan man vurdere om absorbans-resultater er gyldige?
Transmisjon - Mengden lys som passerer gjennom en løsning. Desto mer lys som transmitteres, jo mindre er konsentrasjonen.
Absorbans - Lyset som absorbers av en løsning.
Transmisjon og absorbans er omvendt proporsjonale. Når absorbansen i løsningen øker, avtar transmisjonen.
Transmisjon kan beregnes ved: T = I/I0
Utregnet transmisjon kan videre brukes til å beregne absorbans: - log T
Forklar i korte trekk oppbyggingen til et spektrofotometer.
Et spektrofotometer består av en lyskilde (lampe), monokromator (linse, prisme, spalte), prøveholder (kyvette) og fotodetektor + strølysfilter (?)
- Lyskilden sender hvitt lys gjennom en spalte/linse, som fokuserer lysstrålen inn mot et prisme
- Lyset brytes gjennom prismet til et kontinuerlig spekter som inneholder alle synlige bølgelengder
- Det bruttet lyset går videre inn i en spalte. Her blir alle de uønskede bølgelengdene filtrert bort, og det sendes kun én bestemt bølgelengde (monokromasi) inn mot kyvetten
- Noe av lyset vil absorberes av prøven, og en svakere lysintensitet kommer ut av kyvetten (transmisjon)
- Det transmitterte lyset vil til slutt detekteres av en fotodetektor, som registreres i form av absorbans
Kom med eksempler på potensielle avvik til Beers law, og hvordan dette kan påvirke målingene.
Instrumentelle avvik:
Monokromatisk lys er en forutsetning for Beers law, og er essensiell for å gi en lineær sammenheng mellom absorbans og konsentrasjon. Dersom man ikke har monokromatisk lys, kan det føre til for høy transmisjon og dermed lavere absorbans.
Strølys - Uønsket lys. Kan f.eks komme fra utvendig belysning. Påvirker absorbansen.
Skitten kyvette fører til unøyaktige målinger, f.eks ved at mindre transmittert lys kommer ut gjennom kyvetten. Detter kan gi en falskt forhøyet absorbans.
Kjemiske avvik:
Flere kromoforer ved aktuell bølgelengde kan føre til en overlapping av absorbanstopper.
Ikke konstante betingelser / forhold …
Hva er et absorbansspektrum, og hva kan det brukes til?
En graf som viser kromoforens absorbans mot bølgelengde.
Finne bølgelengde som vil gi mest absorbans og da klarest mulig signal fra prøven. Brukes til å bestemme primær/sekundær bølgelengde.
Forklar kort om atomabsorpsjons-spektofotometri (AAS).
En kvantitativ analysemetode basert på Beers lov. Brukes til bestemmelse av grunnstoffer, hovedsakelig metaller. Forutsetter at man har stoffer på atomær form (enkelt atomer).
Forklar prinsippet i AAS.
Forklar hva som menes med en kinetisk analysemetode.
En lineær regresjonsanalyse som utføres på alle målingspunkter, inkludert første og siste måling. Reaksjonshastigheten måles ved endringAbs / min. Konsentrasjonen av reaktant og produkt endrer seg som en funksjon av tid.
