Jacky de Montigny - Plasmide 2-micron et autres plasmides Flashcards
Donner les caractéristiques du plasmide 2-micron (espèce d’origine, place dans le génome)
Provient de S. Cerevisae. Fait 5% de l’ADN total, soit 6,4 kb.
Caractériser la tramission de 2-mic.
C’est un plasmide sans fonction essentielle, tramis de cellule mère à fille en haut nombre de copies, tout en étant stable en méiose et mitose.
Quelles séquences sont contenues dans 2-mic ?
Des séquences servant à sa réplication, transcription et transmission.
Quelle est la fonction des gènes RAF RAP1 RAP2 et Flp présents dans le plasmide ?
Essentiels à la transmission et RAP1/FLP à la réplication.
Quel est la fonciton du gène STP ?
Essentiel pour assurer une répartition correcte
Quelle est la fonction du gène FRT ?
C’est une séquence répétée inverse qui code pour une recombinase.
Typiquement, dans quel sens va une origine de réplication eucaryote ?
Bidirectionelle.
Comment fonctionne la transmission de ce plasmide ?
Le système de répartition se compose des 2 séquences Rep1 et Rep2 qui agissent en trans. Rep 3 permet au plasmide d’être partagé correctement, et agit en cis.
Comment est-ce que les séquences Rep1, rep 2 et rep3 se mouvent sur ce plasmide ?
Utilise le chromosome comme véhicule en se fixant aux cohésines des chromatides.
Quand dit-on d’un plasmide qu’il est un vecteur ?
Il faut que le plasmide soit transmis dans la descendance et répliqué.
Quelle est l’origine de tous les vecteurs de S. Cerevisae ?
D’origine bactérienne : ce sont des vecteurs navette. Ils servent à l’amplification chez E.Coli puis deviennent vecteurs chez Cerevisae.
Donner trois exemples de vecteurs.
YIP : vecteur intégratif n’étant pas doté d’une origine de levure, et intégrant le génome par recombinaison homologue.
YEP : vecteur réplicatif à haut nombre de copies et stable.
YcP: vecteur réplicatif avec Ori chromosomique ARS, stable et à faible nombre de copies.
Comment transformer des levures ?
Li-Ac, électroporation, balistique.
Que permet précisément Li ?
De perméabiliser la membrane sans se débarasser de la paroi cellulaire.
Que fait précisément une transformation balistique ?
On tire des particules de tengstène avec l’ADN fixé dessus
