Jacky de Montigny - les vecteurs autoréplicatifs Flashcards
Quel intérêt de cloner par complémentation de fonction ?
Permet d’isoler et cloner un gène d’intérêt.
Comment marche un clonage par complémentation ?
On part d’une banque avec un génome, on le fragment en segments de 10 kb, puis on fait frag chevauchants pour couvrir le génome et on a une grand pb de trouver le gène.
Comment isole-t-on le plasmide ?
On prépare de l’ADN total puis transfection E. Coli et sélection AmpR.
Quel type de gènes humains peut être isolé avec un plasmide de levure ?
Uinquement des gènes dont la fonction est conservée avec suffisemment d’identité de séquence pour que la protéine puisse être fonctionelle.
Comment peut on surexprimer une protéine dans une levure ?
On utilise le vecteur YEp avec des marqueurs et un promoteur fort.
Si le nombre de copies de la protéine surexprimée est trop élevée que cela peut provoquer ?
Une toxicité
Quels sont les effets des péroxysomes ?
Dégradation des lipides par oxydation et détox.
Qu’est-ce qu’un “suppresseur” ?
Un mutant qui élimine les effets d’une première mutation.
Comment nomme-t-on un suppresseur qui se trouve sur un autre gène ?
Un suppresseur extragénique. A l’opposé des intragéniques, situés sur le même gène.
