Infärgningstekniker Flashcards
Hur fungerar olika vävnader?
Olika vävnader har olika morfologi (Vilket är läran om organismers uppbyggnad och form). Detta gör att om man ska kolla på dem i mikroskop behöver de olika färgnings typer.
Ge exempel på några typer av material som kan kommas att färgas hos patologen.
- Operationsmaterial
- Provexitationer
- Biopsi-material
- Punktionsmaterial
- Cellutstryk
- Autopsier
Hur fungera utskärning av olika preparat?
man tar antingen
- tvärsnitt/ längdsnitt
- vävnadens uppbyggnad
- Organets uppbyggnad
- från förändringen (malignt melanom)
Vad innebär Fixering av ett preparat?
Ett ”ögonblickligt” avstannande av livsprocessen med minsta möjliga förändring av vävnaden
- Finns två typer immersionsfixering och perfussionsfixering
Viktigt att tänka på vid fixeringsmomenten ..
Tänk på betydelsen av: •Val av fix.medel •Koncentration av fix.medel •Fixeringstidens längd •Fix. medels Temperatur •Volym av fix.medel
Vad exakt händer vid fixeringsmomenten ?
-viktigaste steget vid prep.framställning
Detta händer vid fixering:
• Proteinerna och protoplasmatiskasubstanser stabiliseras och vävnaden hårdnar
• Enzymernas aktivitet minskas. Autolys förhindras
• Bakterier fäster ej på fixerade celler –ingen förruttnelse
• Gör cellulära substanser olösliga och motståndskraftiga mot processeringi kommande lösningar
• Förbereder så att ett färgat preparat tydligt visar cellkärnans mönster, de epitelialacellmembranen och cytoplasman
• Många artefakter skapas ibland –ej önskvärt
Vad innebär autolys?
Autolys beroende på fördröjd fixering, dåligt definierade kärnor, oprecis cytoplasmafärgning
Vad är den vanligaste fixeringsmedlet finns det något mer?
Fixering i formaldehyd (vanligaste fix) resp. etanol
Vad händer med preparatet i formaldehyd fixering?
Kärnorna och cytoplasman är bra fixerade. En aning krympning av cellerna.
Vad händer med preparatet i 95% etanol fixering ?
Cellkärnor är välbevarade medan cytoplasman har krympt endel.
Hur kan stabilisering av protein ske med hjälp av fixering ?
Denaturerande fix.medelex. Etanol förändrar proteinernas form, men formen förändras ej av de gelerande fix. medel ex Formalin
Hur lång tid skulle de ta för en tjock levervävnad att bli färdigfixerad ?
Det tar 2 dygn för en 3 mm tjock levervävnad att bli färdigfixerad i 4% ig formaldehyd, vid rumstemp.
Det finns tre viktiga steg för att få ett preparat helt korrekt vilka?
Dehydrering, inbäddning och snittning
Nämn alla steg i vävnaders preparering
- Utskärning: av intressant del, lämplig storlek
- Fixering: ”ögonblickligt” avstannande av livsprocessen, med minsta möjliga förändring
- Dehydrering: borttagande av vatten i vävnad
- Inbäddning: indränkning och omslutning av inert hårt medel ex. av paraffin
- Snittning: tunna skivor (c:a 4-5 µm) av vävnad framställs
- Visualisering: kontrast skapas i snittet
- Montering: montering av täckglas för att skydda snittet
- Mikroskopering: vävnaders och cellers utseende studeras i mikroskop
Vad är syftet med visularisering ?
- Syfte: Visualisering av vävnadens struktur för att få en kontrastrik mikroskopisk bild;
- Deparaffinering
- Rehydrering
- ”Framkallning” av färg
- Dehydrering
- Montering av täckglas
Varför använder vi infärgningstekniker ? Hur fungerar dem?
För att skapa kontrast – som ändrar ljusets våglängd
- Kunna se cellkärnor och annat intressant material
- Fungerar så som: olika lösningar efter varandra eller samtidigt, reagerar med cellerna i vävnaden
Ämnen/instrument som hjälper till för att ge kontrast nämn några…
- Färgmolekyler –färgning
- Metaller –impregnering
- DNA-prober –in situ hybridisering
- Antikroppar –immunohistokemi/cytokemi
- Fluorescerande ämnen –fluorescencemikroskopi
- Enzymer –enzymhistokemi
- Isotoper –autoradiografi
- Faskontrast faskontrastmikroskopi
Kemiska bindningar/krafter mellan ”färg”och vävnad hänger ihop hur då?
- Intramolekylärakrafter •Kovalentbindning/polärkovalentbindning • Jonbindning • Metallbindning - Intermolekylärakrafter • vätebindning • dipol-dipolbindning • van derWaals bindning - ”Likalöserlika” • Hydrofoba/hydrofilakrafter
Hur fungerar färgmolekylens affinitet till vävnaden ?
Affinitet: Ämnens benägenhet att reagera med varandra, dragningskraften mellan molekyler. Beror ex. på; • Reaktiva grupper hos färgmolekyl och vävnad • Diffusions hastigheten hos färgmolekylen – molekyl/aggregat-storlek – lösningsmedel –koncentration – pH – temperatur • Permeabilitethos vävnad – täthet – ev .förbehandling – tid
När används infärgning av metaller ?
För att få fram nervtrådar, svamp, elastiska fibrer bland annat.
Vad innebär Immunhisto kemiska metoder?
Antikroppar binder till epitoper på vävnaden
Vilka är dem viktigaste infärgningarna för mig att känna till?
- Eosin-Haematoxylin (Kärnor –blå Cytoplasma –rosa Blodkroppar –röd) - LuxolFast Blue (Myelin–blå Nisselsubstans–Violett) - Richardson (Metylen –blå AzurII–blå) - Toluidinblå (–blått) - Elektronmikroskopi (Tungmetaller Elektroner)
Vad är viktigt att känna till om infärgningen ?
Många färg ämnen/lösningar är toxiska, cancerogena eller mutagena!– Viktigt med rätt Avfallshantering!
- Glöm ej positiva och negativa kontroller där det behövs! Ex. för Immunhisto kemi
Exempel på färgnings medel som är farliga för oss…
Väteperoxid: (är 30%), starkt oxiderande, kan ge frätskador. Kan spolas ner i vasken. Använd handskar.
DAB: Cancerogent. Handskar, skyddsglasögon, skyddskläder, dragskåp. Samlas i särskild behållare –skickas till destruktion.
Xylene: Organiskt lösningsmedel, brandfarligt, undvik inandning och hudkontakt. Använd dragskåp. Samlas i särskild behållare –skickas till destruktion.
Etanol: Organiskt lösningsmedel, brandfarligt. Kan spolas ner i vasken.
Mayers HTX :Giftigt för vattenlevande organismer. Samlas i särskild behållare.
