Hoofdstuk 4 Microscopy; staining; Classificatie Flashcards

1
Q

In wat worden Micor-organisme gemeten?

A

-Micrometer µm (10-6)
-Nanometer nm (10-9)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Wat is Microscopy?

A

Het gebruik van licht of elektronen om objecten te vergroten

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Wat voor soorten licht worden gebruikt bij microscopy?

A

-Visible light (400nm - 700nm)
-Ultraviolet (UV) light

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Welke soorten Wavelength of Radiation zijn er?

A

-Gamma rays
-X-rays
-UV licht
-Zichtbaar licht
-Infra-rood
-Micro-wave
-Radio en telivisie golven

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Van wat is zichtbaar licht gemaakt?

A

Een smalle band van straling

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Wat is Magnification?

A

Schijnbare toename in grootte van een object
Aangewezen als een cijfer en X (keer)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Hoe gebeurt het vergroten bij Magnification?

A

Met glazen lenzen (lichtmicroscopie) of magnetische lenzen (elektronenmicroscopie)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Wat is Resolution?

A

Oplossend of scheidend vermogen
-Mogelijkheid om 2 uit elkaar gelegen punten als afzonderlijke punten te onderscheiden
-Hoe beter de resolutie, hoe beter punten van elkaar onderscheiden kunnen worden

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Wat is het scheidend vermogen van het Oog?

A

100µ of 0.1 mm

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Wat is het scheidend vermogen van de beste lichtmicroscopen?

A

0.2µm

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Van wat is De Resolution afhankelijk?

A

-De golflengte van de elektromagnetische straling
-Numerieke apertuur van de lens (vermogen van de lens om licht te capteren)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Wat is de Formule van Resolutie?

A

R = 0.61 x Golflengte gedeeld door de Numerieke apertuur

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Wat doen kortere golflengte?

A

Geven een betere resolutie

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Wat is Contrast?

A

Verschil in lichtintensiteit tussen 2 objecten of tussen een object en zijn achtergrond

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Voor wat is contrast belangrijk en hoe kan je het verhogen?

A

-Voldoende contrast is belangrijk voor een goede resolutie
-Kleuren van objecten verhoogt het contrast met de achtergrond
-Gebruik van licht in fase kan ook het contrast verhogen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Wat is een Licht microscoop?

A

Elk type microscoop die licht gebruikt om monsters of stalen te observeren

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

Wat zijn de verschillende types van licht microscopen?

A

-Helderveld microscopen
-Donkerveld microscopen
-Fase-contrast microscopen
-Differentiële interferentie contrast microscopen
-Fluorescentie microscopen
-Confocale microscopen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

Wat zijn helderveld microscopen?

A

Donkere voorwerpen zijn zichtbaar tegen een heldere achtergrond

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

Geef kenmerken van een Enkelvoudige microscoop (helderveld)

A

1 enkele lens
Vergelijkbaar met vergrootglas
(vb microscopen van antoni van leeuwenhoek)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

Hoe werken samengestelde microscopen? (helderveld)

A

-Meerdere lenzen voor vergroting
-Licht gaat door specimen en komt zo in het objectief terecht
-Bezitten 1 of 2 oculaire lenzen (monoculair, binoculair)
-Totale vergroting (vergroting objectief x vergroting oculair)
-Meestal condensor aanwezig (bundelt lichtstralen door het specimen)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
21
Q

Voor wat wordt Immersie-olie gebruikt bij samengestelde helderveld microscopen?

A

-Vergroot de resolutie

-Licht kan in lucht zo sterk gebonden worden dat het niet wordt opgevangen door het objectief met de sterkste vergroting - Immersie olie gaat deze breking tegen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
22
Q

Wat zijn Donkerveld microscopen?

A

Heldere voorwerpen zijn zichtbaar tegen een donkere achtergrond

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
23
Q

Wat zijn kenmerken van Donkerveld microscopen?

A

-Enkel licht dat gebroken of gereflecteerd wordt door het specimen komt in het objectief terecht
-Verhoogt contrast
-Bruikbaar om kleine en kleurloze cellen te onderzoeken

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
24
Q

Wat doen Fase-contrast microscopen?

A

-Accentueert de diffractie van het licht dat door een specimen gaat (contrast wordt gecreëerd door lichtgolven die uit fase lopen)
-Laat onderzoek van levende organismen toe

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
25
Q

Wat doen Fluorescentie microscopen?

A

-Gebruikt UV-licht (korte golflengte)
-Fluorescerende substanties absorberen UV-licht en zenden zichtbaar licht (met langere golflengte) uit
-Cellen kunnen gekleurd worden door fluorescerende kleurstoffen (als ze niet van nature fluoresceren)

26
Q

Wat is een nadeel van een Fluorescentie microscoop?

A

Fotobleaching - verloop van tijd vervaagt de fluoritentie
Interferen met elkaar

27
Q

Geef eigenschappen van een Confocale microscopen

A

-Gemodificeerde fluorescentiemicroscoop
-Ook gebruik van fluorescerende kleurstoffen of fluorescente antilichamen
-Gebruik van UV lasers om de fluorescente chemicaliën te exciteren en dit in 1 enkel vlak
-De laser kan verschillende vlakken van een object afscannen en een beeld kan bekomen worden van elk vlak
-Een computer reconstrueert een 3D beeld

28
Q

Wat is een nadeel van een Fluorescentie microscoop?

A

Fotobleaching - verloop van tijd vervaagt de fluoritentie
Interferen met elkaar

29
Q

Geef eigenschappen van Elektronen Microscopen

A

-Maken gebruiken van bundels van elektronen
-Veel grotere resolutie dan lichtmicroscopen (0.1 nm)
-Vergroten objecten in de range van 10 000 tot 200 000X
-Laten een gedetailleerde studie toe van intracellulaire structuren, bacteriën, virussen en grote atomen

30
Q

Wat zijn de twee types van Electron microsccopy?

A

-Transmissie elektronenmicroscoop (TEM)
-Scanning elektronenmicroscoop (SEM)

31
Q

Wat wordt er gedaan bij Transmissie elektronenmicroscopen?

A

-Beelden van doorsneden bekijken
-Ultradunne staaltjes worden op metalen roostertje gebracht
-Elektronen gaan door specimen, dan door elektromagnetische lens, en vervolgens worden ze op een fluorescerende plaat geprojecteerd zodat ze zichtbaar worden
-Op plaatsen waar het preparaat het meest dens is treedt de meeste verstrooiing van elektronen op, zodat het aantal elektronen dat uiteindelijk vastgelegd wordt kleiner is. Het gevormde beeld is dan donkerder in vereglijking met de minder dense plaatsen van het preparaat

32
Q

Wat zijn voorwaarden van Transmissie elekronenmicroscopen?

A

-Elektronenbundel kan alleen voortbewegen in vacuum (geen levende objecten)
-Coupes moeten veel dunner zijn dan bij lichtmicroscopie
-Preparaten kunnen gekleurd worden met zware metaalzouten om contrast te verhogen
-Enkel zwart-wit beelden, 2 dimensionaal
-Enorm duur
-Veel expertise voor nodig

33
Q

Wat gebeurt er bij Scanning elektronenmicroscopen?

A

-Beelden van oppervlakte bekijken
-Specimen wordt vooraf gecoat met een zwaar metaal zoals platinum of goud
-Elektronen gaan niet door specimen

-Het object wordt volgens een scanning beweging gebombardeerd met elektronen geproduceerd door het elektronengeweer. Deze invallende elektronen maken aan de oppervlakte secundaire elektronen vrij. Deze secundaire elektronen, uitgezonden door het object, produceren het beeld

34
Q

Wat kan er gedaan worden bij Scanning elektronenmicroscopie?

A

-Een volledig object kan worden bestudeerd
-3D beelden kunnen worden gegenereerd
-Enkel oppervlaktestructuren kunnen vergroot worden
-Zwart-wit beelden die kunnen worden ingekleurd

35
Q

Wat is Staining?

A

-Vergroten van contrast tussen structuren en tussen een specimen en de achtergrond
-Het micro-organisme wordt behandeld met een kleurstof die bepaalde structuren accentueert

36
Q

Hoe wordt een exemplaar voorbereid voor staining?

A

-Maken van een uitstrijkje (dun laagje van een suspensie bacteriën op een voorwerpglaasje)

-Fixeren van het uitstrijkje:
Om micro-organisme te doen vasthechten op het glaasje en ze tegelijkertijd te doden
Hitte fixatie of chemische fixatie

37
Q

Wat is een chromofoor?

A

Kleurstoffen bestaan uit een positief en negatief ion, één van beide is gekleurd

38
Q

Wat is de chromofoor in een basische kleurstof?

A

Een positief geladen ion

39
Q

Wat is de chromofoor in een zure kleurstof?

A

Een negatief geladen ion

40
Q

Wat is Negatieve kleuring?

A

Wanneer de achtergrond gekleurd word in plaats van de cel
(laat toe kapsels goed zichtbaar te maken)

41
Q

Wat is een Enkelvoudige kleuring?

A

-Slechts 1 basiskleurstof gebruikt
-Legt de focus op het volledige Micro-organisme, de grootte, de vorm en structuren
vb: methyleenblauw

42
Q

Wat is Differentiële kleuringen

A

-Gebruiken meer dan 1 kleurstof
-Worden gebruikt om een onderscheid te kunnen maken tussen cellen en structuren

43
Q

Wat zijn veel gebruikte differentiële kleuringen?

A

-Gram kleuring
-Vuurvaste kleuring
-Endosporen kleuring
-Histologische kleuringen

44
Q

Wat houdt Gram kleuring in?

A

Classificeert de bacteriën in gram-positief of gram-negatief

45
Q

Wat zijn de eigenschappen van Gram-posititieve en negatieve bacteriën?

A

Gram-positieve: Dikke peptidoglycaanlaag in hun celwand

Gram-negatieve: Dunne peptidoglycaanlaag, een buitenmembraan met lipopolysachariden in hun celwand

46
Q

Wat zijn de stappen in Gram kleuring?

A

-Applicatie van crystal violet: eerste kleurstof (allebei paars)
-Applicatie van Iodine: beitmiddel (zorgt dat de crystal violet sterker bindt)
-Wassen met alcohol: ontkleuringsmiddel (positief blijft kleur behouden, negatief ontkleurt
-Applicatie van safranin: Tweede kleurstof (positief blijft paars, negatief wordt rood)

47
Q

Voor wat wordt Zuur-vaste kleuring gebruikt?

A

Om cellen te onderscheiden van de geslachten (mycobactertium, Nocardia)
-Deze bacteriën bezitten grote hoeveelheden aan wasachtige substanties in hun celwand (kleuren niet gemakkelijk met wateroplosbare kleurstoffen)

48
Q

Wat zijn de stappen in Zuur-vaste kleuring?

A

-Eerste kleurstof (Carbolfuchsine)
-Ontkleuring (zure alcohol): (zuur vaste behoudt kleur, niet zuur vaste wordt kleurloos)
-Tweede kleurstof (methyleenblauw)

49
Q

Wat zijn Endosporen?

A

resistente, slapende structuren die in de cel gevormd worden en die niet kunnen gekleurd worden met gewone kleurtechnieken

50
Q

Hoe gebeurt endosporen kleuring?

A

-Eerste kleurstof: malachietgroen (meestal met verwarming)
-Ontkleuring: water
-Tegenkleuring: Safranine

-> Sporen kleuren groen tegen roze of rode cellen

51
Q

Geef een voorbeeld van Flagella kleuring

A

Carbolfuchsine in combinatie met beitsmiddel

52
Q

Hoe gebeurt kleuring voor elektronenmicroscopie?

A

Contrasteren gebeurt niet met gewone kleurstoffen maar met zouten van zware metalen (absorberen elektronen zodat er minder op de fotografische plaat terechtkomen)

53
Q

Wat zijn identificatie methoden van Micro-organisme?

A

-Fysische eigenschappen
-Biochemische testen
-Serologische testen
-Faagtypering
-MALDI-TOF-massaspectromerie
-Analyse van nucleïnezuren

54
Q

Hoe worden MO geidentificeerd door fysische eigenschappen?

A

Aan de hand van Morfologie (vorm):
-Morfologie van de cel
-Morfologie van de kolonie
-Kleuring
-Beweeglijkheid

55
Q

Wat gebeurt er bij Biochemische testen?

A

Nagaan welke chemische producten de bacterie kan gebruiken of produceren

56
Q

Wat gebeurt er bij Serologische testen?

A

Studie van antigen-antilichaam interacties in het laboratorium
-Vele MO triggeren een imuunrespons die leidt tot de productie van antilichamen
-Antilichamen kunnen gebruikt worden om micro-organismen te identificeren

57
Q

Wat is Faagtypering

A

Met behulp van bacteriofagen (bacterievirussen) kan men het faagtype van een stam (binnen een soort) bepalen

De te onderzoeken bacterie wordt egaal op een voedingsbodem uitgestreken, waarna volgens een vast patroon de verschillende bekende fagen (met standaard codes) op vaste plaatsen “boven op” de bacteriën worden aangebracht

58
Q

Wat zijn Bacteriofagen?

A

Virussen die bacteriële cellen infecteren
(zijn specifiek voor de gastheer die ze infecteren)

59
Q

Wat is MALDI/TOF massaspectrometrie?

A

Identificeren van eiwitten karakteristiek voor bepaalde species

60
Q

Wat houdt analyse van Nucleïnezuren in?

A

Nucleïnezuursequentie kan gebruikt worden om bacteriën te classificeren en identificeren
-G+C gehalte kan bepaald worden