Hibridoma y ADN Recombinante

Question 1

¿Cual de las siguientes enzimas bacterianas es responsable de restringir el crecimiento de virus?
- Topoisomerasa
- Girasa
- Proteasa
- Enzimas de restricción

Answer 1

Enzimas de restricción

Question 2

¿Cual de las siguientes enzimas se utiliza para unir dos fragmentos de DNA?
- Proteasa
- Endonucleasa
- Ligasa
- Exonucleasa

Answer 2

Ligasa

Question 3

El gen de resistencia antibioticos puede ser utilizado como marcador de ……….
-Diferenciacion de celulas transformadas
- Radioactividad de celulas transformadas
- Seleccion de celulas transformadas
- Similitud de celulas transformadas

Answer 3

Seleccion de celulas transformadas

Question 4

Se le llama DNA recombinante cuando

Answer 4

Hay secuencias de DNA derivadas de mas de una fuente

Question 5

Los anticuerpos monoclonales son producidos por:

Answer 5

Tecnologia de hibridoma

Question 6

Los sitios que reconocen las enzimas de restriccion :
- Regiones ricas en AT
- Secuencias palindromicas
- Regiones ricas en CG
- Secuencias en tandem

Answer 6

Secuencias palindromicas

Question 7

¿Que es lo que ayuda a identificar a las celulas transformadas?

Answer 7

Marcador de seleccion

Question 8

El proceso por el cual un DNA foraneo es introducido a una bacteria, se llama:

Answer 8

transformación

Question 9

Para insertar un gen en un plasmido, los dos:
- Deben de tener secuencia identica de DNA
- Deben ser del mismo tamaño
- Se originan de la misma celula
- Deben de ser cortados por la misma enzima de restriccion

Answer 9

Deben de ser cortados por la misma enzima de restriccion

Question 10

Sufijo de un anticuerpo monoclonal humano:

Answer 10

mumab

Question 11

Para que mi plasmido funcione como vector debe tener en su estructura

Answer 11

Debe tener un origen de replicación, gen de resistencia antibiótica y región de ADN exógeno (20kb).

Question 12

En el DNA recombinante:
- Esta formado por dos fragmentos de DNA de la misma especie.
- Determinados fagos y plásmidos son utilizados como vectores
- EL DNA recombinante no se puede introducir en el citoplasma
- El DNA del vector puede ser cualquier molécula de DNA

Answer 12

Determinados fagos y plásmidos son utilizados como vectores

Question 13

El DNA recombinante se crea a partir de:
- Protozoarios
- Bacterias
- Parásitos
- Virus

Answer 13

Bacterias

Question 14

Enzimas de restricción corta en el mismo sitio de reconocimiento y son utilizadas en tecnología del DNA recombinante

Answer 14

Tipo II

Question 15

Cual es proceso general de formar un ADN recombinante? (5)

Answer 15

1. Se selecciona un gen de una célula eucariota y se corta con una enzima de restricción
2. Se agarra un plásmido de una bacteria y se corta con la misma enzima de restricción.
3. Se inserta el gen de la eucariota, con la ayuda de un bacteriofagio, en el plásmido y se unen con una ligasa.
4. Se introduce el ADN recombinado en la célula huésped.
5. La células hueésped (bacteria) clona el gen y produce sus productos.

Question 16

La nomenclatura de bacterias se puede dividir en 3 partes. Cuales son estas partes?

Answer 16

• Acrónimo de 3 letras cursivas: 1 es género, 2 y 3 nombre de la especie.
• Letras y/o número de acuerdo a la cepa o serotipo.
• Número romanos de acuerdo a la cronología en que se aislaron (descubrieron).

Question 17

Que son las enzimas de restricción?

Answer 17

Son las enzimas que cortan el ADN extraño. Actuan como mecanismo de defensa de las bacterias.

Question 18

Las enzimas de restricción se pueden dividir en dos tipos. Cuales son estos?

Answer 18

• Enzimas del sistema de modificación: principalmente metilasas que metilan los residuos de adenina o citosina del ADN propio para evitar su degradación.
• Endonucleasas: cortan.

Question 19

Cual es el tipo 1 de endonucleasa?

Answer 19

Son asimétricos y cortan el ADN muy lejos (1000pb) del sitio de reconocimiento. –> Sitio de corte aleatorio. Puede ser rio abajo o rio arriba.

Question 19

Cual es el tipo 2 de endonucleasa?

Answer 19

Reconocen secuencias palindrómicas las cuales van a ser el sitio de reconocimiento y el sitio de corte. Hacen dos tipos de corte.

Question 20

Cual es el tipo 4 de endonucleasa?

Answer 20

Reconoce el ADN metilado. Importantes en el sistema de defensa.

Question 20

Que son los vectores?

Answer 20

Son estructuras capas de albergar un fragmento de ADN exógeno.

Question 21

Cual es la endonucleasa más usada en la tecnología de ADN recombinante? Por qué?

Answer 21

La endonucleasa tipo 2 debido a su corte predecible

Question 22

Cuales son los dos tipos de corte de las endonucleasas tipo 2?

Answer 22

• Cohesivo: cortes asimétricos, dejando extremos cohesivos/complementarios. 3-5nt de diferencia.
• Romo: cortes simétricos en ambas cadenas.

Question 23

Cual es el tipo 3 de endonucleasa?

Answer 23

Son asimétricos y cortan el ADN lejos (10-30pb) del sitio de reconocimiento.

Question 24

Que vectores hay?

Answer 24

Plásmidos, bacteriófagos, fagémidos, cósmidos y cromosmas artificales.

Question 25

Que son los plásmidos?

Answer 25

dsADN circulares pequeños separados del ADN cromosómico de las bacterias y levaduras. Dan características especiales. Albergan genes pequeños.

Question 26

Que son los bacteriófagos?

Answer 26

Son virus que infectan a la bacterias. Son grandes y albergan genes grandes.

Question 27

Los bacteriofagos pueden invadir el ADN cromosómico. Que se les hace para evitar esto?

Answer 27

Se eliminan sus genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento. De esta forma, solo invaden los plásmidos.

Question 28

Que son los fagémidos?

Answer 28

Son plásmidos al que se le incoprora el origen de replicación de un fago. Se quea lineal dentro del bacteriofago = no tiene sitios cos.

Question 29

Que son los cósmidos?

Answer 29

Se modifica un plásmido para albergan un gen más grande con la adición de sitios Cos en sus extremos.

Question 30

Que son los cromosmas artificiales?

Answer 30

Se agarra una bacteria o levadura –> se extrae el ADN cromosómico –> se le pone del gen deseaso –> se inserta otra vez. Son cromosomas modificados.

Question 31

Cual es el vector que también se le conoce como castor hibrido?

Answer 31

Los cosmidos

Question 32

Que permiten los sitios Cos?

Answer 32

Permiten la plegación del plámido en su forma cirular dentro dell bacteriofago.

Question 33

Que son los BAC y los YAC?

Answer 33

Son cromosomas artificales
- BAC: bacterias - procariotas.
- YAC: levaduras - eucariota.

Question 34

En la clonación, que tipos de vectores se pueden usar?

Answer 34

Plásmidos, bacteriofagos, fagémidos y cósmidos.

Question 35

Que hace la clonación?

Answer 35

Replican un gen de una célula. Almacenamiento de genes. ADN recombinante.

Question 36

Cuales son los componentes necesarios para la clonación?

Answer 36

• Origen de replicación (ori)
• Sitio múltiple de clonación (SMC)
• Marcador de selección (Amp)

Question 37

Que son las secuencias polindrómicas?

Answer 37

Son secuencias que se pueden leer igual bidireccionalmente.

Question 38

Ejemplos de marcadores de selección

Answer 38

Resistencia de antibióticos, gen lacZ-beta-galactosidasa y colorante verde fluorescente.

Question 39

Cuales son los pasos generales de la clonación? (7)

Answer 39

1. Se corta el inserto que se va a clonar con una enzima de resticción tipo 2.
2. Se corta el vector con la misma enzima de restricción –> desfosforila –> se purifica.
3. Se une el inserto y el vector con una ligasa.
4. Se pone glicerol al 10% y CaCl2 a células bacterianas para hacer su membrana temporalmente.
5. Se introduce el ADN recombinante en la células competentes –> adquieren el gen exógeno –> nuevo fenotipo.
6. Se ponen las células en un marcador de selección –> se identifican las células que han adquirido el ADN recombinante (sobreviven).
7. El gen se replica –> produce proteínas o se almacenan los genes.

Question 40

Que son las colonias transformantes?

Answer 40

Son las bacterias que han adquirido el ADn recombinante.

Question 41

Cuales son los componentes de ADN recombinante por expresión?

Answer 41

• Origen de replicación (ori)
• Sitio múltiple de clonación (SMC)
• Marcador de selección (Amp)
• Promotor: secuencia de ADN que inicia la transcripción del gen insertado en el vector a ARNm.
• IRES o internal ribosome entry site: es una secuencia que permite la traducción de ARNm en los ribosomas.
• Secuencia de poliA: importante para al estbailidad y la exportación del ARNm del núcleo al citoplasma.

Question 42

Qué es el origen de replicación (Ori)?

Answer 42

es donde se separan las hebras.

Question 43

Qué es el sitio múltiple de clonación (SMC)?

Answer 43

Son las secuencias polindrómicas. Reconocido por llas enzimas de restricción para poser insertar el ADN complementario.

Question 44

Que es el marcador de selección (Amp)?

Answer 44

Funciona para filtrar las bacterias que internalizan el plasmido de las que no. Las que si, sobreviven, las que no, mueren.

Question 45

Que son los hibridomas?

Answer 45

Son células diseñadas para producir anticuerpos monoclonales en grandes cantidades.

Question 46

Cuales son los métodos para crear anticuerpos monoclonales?

Answer 46

• Tecnología de hibidroma
• ADN recombinante
• Ribosoma display

Question 47

Como se producen los anticuerpos? (3)

Answer 47

1. Linfocitos B en su etapa madura exprexan IgM e IgD.
2. Se unen a un antígeno específico –> activación –> proliferación clonal –> se diferencian en células plasmáticas.
3. Células plasmáticas secretan anticuerpos capaces de neutralizar al antígeno específico.

Question 48

Cuales son las características de los anticuerpos monoclonales?

Answer 48

• Monovalentes
• Se unen a un epítopo (muy específicos)
• Son producidos por una clona de linfocitos B

Question 49

Cuales son los pasos de producción de una nticuerpo monoclonal? (7)

Answer 49

1. Los ratones son inmunizados con el antígeno de interés.
2. Se activan y proliferan los linfocitos B en los ratones, producieendo anticuerpo específicos de este antígeno.
3. Se extraen las células B del bazo.
4. Las células B se fusionan con células de mieloma múltiple con técnicas como electrofusión o plietilenglicol.
5. Las células se cultivan en un medio HAT durante 10-14 días. Solo las hibridas sobreviven.
6. Las células hibridas se extraen y se cultivan en pocillos serpados y se analizan de forma individual.
7. Las células híbridas se clonan in vivo o in vitro.

Question 50

Como es la visualización de fagos?

Answer 50

Se inserta ADN del anticuerpo en el genoma del fago M13 (bacteriofago). Este recombinante infecta bacterias como E-coli para que presenten este anticuerpo monoclonal en su superficie.

Question 51

Que es le tecnología del ribosoma display?

Answer 51

Se usa para la síntesis in vitro. Se ponen ribosomas, aminoácidos y un ARNm del anticuerpo deseado en un medio para que produza el acnitucerpo.. Puede ser 100% humano.

Question 52

Hoy en día, como se producen los anticuerpos monoclonales?

Answer 52

Por tecnología ribosoma display

Question 53

Que son los anticuerpos policlonales?

Answer 53

Son diversos anticuerpos rpoducidos por diversas copias de un linfocitos B. Cada uno puede reconocer diferentes antígenos = epítopes.

Question 54

Al incio, los anticuerpos monoclonales se usaban para tratar que?

Answer 54

Linfoma

Question 55

Cuales son los tipos de anticuerpos monoclonales?

Answer 55

• Murinos: terminan en -momab. 0% humanos, 100% ratón. Potencial inmunogénico alto → muerte.
• Quiméricos: terminan en -ximab. La región variable es murina, 66% humano. Potencial inmunogénico intermedio.
• Humanizados: terminan en -zumab. Solo la regiones hipervariables son murinas = 90% humano. Potencial inmunogénico bajo.
• Humanos: terminan en -mumab. Son 100% humanos. Potencial inmunogénico muy bajo.

Question 56

Cuales son los mecanismos de acción de los anticuerpos monoclonales?

Answer 56

• Indirecto: se unen a recpetores superficiales
• Directo: se unen a porteínas.

Question 57

Cual es la vía de administración de los anticuerpos monoclonales?

Answer 57

Vía intravenosa, subcutánea o intramuscular.

Question 58

Por que se usan las células de mieloma múltiple para crear anticuerpos monoclonales?

Answer 58

Los mielomas son células de cáncer de plasma que se han vuelto inmortales y se pueden mantener en cultivo celular de manera indefinida.

Question 59

Cual es la diferencia entre lso cnaitcupos monoclonales y los policlonales?

Answer 59

Los monoclonales vienen de una única línea celular de células plasmáticas que es clonada.
Los anticuerpos policlonales son producidos por múltiples líneas celulares y reconocen varios antígenos.