Hematopoiese - Citometria De Fluxo Flashcards
Basicamente quais celulas o CD45 é positivo? Há diferenca de expressao nessas celulas?
Nos Leucócitos
Dependendo da maturacao há diferencao na expressao
Ex: Baixa expressao em blastos e celulas imaturas e alta expressao em celulas linfoides e mielomonocíticas
E diferenciacao Eritroide como fica o CD45?
No geral pode ter o CD45 em blastos em baixa expressao, mas a medida que ocorre a maturacao eritroide o CD45 fica negativo
Explique o SSC
Basicamente se relaciona com a capacidade de refracao luz ortogonal… Logo reflete componentes subcelulares, granulos, vacuolos e em certo grau o tamanho da celula…
Explique as diferentes celulas baseado no SSC?
- Maturacao neutrofilica com surgimento de granulos primarios há aumento do SSC
- Nova maturacao neutrofilica com surgimento de granulos secundarios e desaparecimento dos primarios há reducao do SSC
- Diferenciacao Monocitica -> ganho de citoplasma, com vacuolos há discreto aumento do SSC (mas menor que na diferenciacao neutrofilica)
- Diferenciacao linfoide citoplasma sem graunols ou vacuolos e uma celula menor logo SSC reduz
- Diferenciação eritroide há aumento do tamanho das células com posterior reducao logo SSC aumenta mas logo reduz semelhante ao linfocito
COmo é a marcacao de celula tronco na imunofeno?
Baixo SSC e FSC
CD45 dim
HLA-DR Dim
CD34 forte
CD38 - ou dim
CD133 dim
CD13 dim
CD117 dim
Outros
Sem outros Ag que definem maturação
Maturacao da CPH?
EM geral reduz expressao CD34 e CD133
Aumenta expressao de CD38 e CD117
Apos diferencia em linhagem mielomonocitica, eritroide, linfoide ou outras…
Diferenciação mielomonocítica da CPH?
TOdas as linhagens em geral há perda do CD34, CD133, CD117 e CD38
Da mielomonocitica surge CD64, CD13, CD33, HLA-DR, CD15 e aumento do SSC
Maturacao da Celula B?
Perde o CD33 e CD13
Reduz o CD45 e SSC
ADquire o CD10 e CD19
Mantem o HLA-DR
Maturação Eritroide?
Adquire o CD71 forte
CD36 intermediario
Reduz o CD45, HLA-DR, CD13 e CD33
AUmenta inicialmente o SSC (mas lembre que dps reduz)
Na maturacao neutrofilica é bem definido cada etapa da maturacao na imunofenotipagem (tipo promielocito, mielocito, meta, bastao e neutrofilo)??
Aprentemente nao.. o que aparece é um continuo único
Apesar de ser um continuo unico a maturacao neutrofilica podemos destacar alguns antígenos que aparecem em determinados estagios?
Sim
Promielocito: CD15 e CD66b
Mielocito: CD11b, CD11c, CD24 e CD66a
Metamielocito: CD55
Bastao: CD35 e CD87
Neutrofilos: CD10
COmo fica o CD64 na maturacao neutrofilica?
Ele é ausente nos blastos
Aumenta em estagio intermediario da maturacao
Negativa no fim da diferenciacao
Pq é o CD15 é tao importante para analise do Promielocito normal?
É esperado que no estagio de Promielocito normal ele ganhe o CD15…
Em situações anormais como na LPA o CD15 é negativo associado com a perda de Ag de imaturidade como CD34 e HLA-DR (Ou seja mostra que é um promielocito anormal)
Maturação monocítica?
Blastos -> Promonócito: ganho CD64, CD33, HLA-D, CD36, CD15
Reducao do CD13 e Aumento do CD45
Promonocito -> Monócito: aumento CD14, CD11b, CD13, CD36, aumento do CD45 e Redução do CD15 e HLA-DR
Qual a grande diferença da maturação monocítica para a granulocítica na imunofeno?
Basicamente na granulocitica expressão de CD64, HLA-DR e CD33 tendem a reduzir com a maturação…
Na linhagem monocitica isso nao ocorrre
Há aumento da Expressao do CD64 e persistencia do HLA-DR e CD33
O Monocito maduro tem CD14, CD33, CD36, CD64 forte e baixo CD15
Quando preparamos amostrar com uso de reagentes como NH4Cl para lise de Hemacias qual tipo de celula eritroide fica para tras?
Proeritroblastos
Maturacao eritroide?
Blastos -> Proeritroblasto:
CD71 forte, CD36 e CD117 intermediario com CD45 intermediário, SSC e FSC altos
Obs: Glicoforina A (CD235a) é expresso em baixos níveis nesses estágios iniciais
ProEritroblasto -> Eritroblasto:
Reducao do CD45 e surgimento do CD235a forte (Fica ate a maturacao final)
Eritroblasto basofilico -> Eritroblasto poli/ortocromatico:
Perde o CD45 e HLA-DR e reduz o CD36
Eritroblasto poli/Orto -> Eritrocito/ Hemacia:
Perdem o CD71 e CD36 logo após anucleadas
Na maturacao Eritroide o CD235a (glicoforina A) pode ser usado como marcador para identificar a linhagem Eritroide ??
POde… MAs lembre que na fase de Proeritroblasto o CD235a nao esta presente…
Ele surge no Eritroblasto basofilico
Quais estagios de maturacao da Celula B pela imunofeno?
Do menos maduro para o mais
-TdT, CD79a, CD10 dim, Sem CD19 (pop pequena geralemnte nao identificada)
- CD19, CD34, TdT, CD10 forte e CD45 baixo sem CD20 e Sem sIg
- Redução do CD10, ganho do CD45, CD20 e perda CD34 e do Tdt
- CD20 forte, negativacao do CD10, aumento do CD45 e surgimento da sIg
- Celula madura CD10, CD20, CD45 forte com sIG
- Plasmócito: CD38 e CD138 sem CD20
Todo o processo de maturacao da Celula B tem o CD19 positivo?
Praticamente sim, mas lembre que em estágios iniciais pode encontrar células CD19 negativas com TdT, CD79a positivos e CD10 dim
