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Citometria Linfoproliferativas T/NK Flashcards

1
Q

Basicamente de onde vem os Linfomas T e NK?

A

Em geral sitio primario pode ser linfonodal, pele ou extranodal
(PTCL, SS, Cutaneos)

Alguns podem ser do SP e MO
(Leucemia prolinfocítica T, LGL, Leucemia NK agressiva, CLPD-NK)

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2
Q

Basicamente como fazer o diganóstico desses linfomas?

A
  • Biópsia pela patologia e IHQ
  • Imunofenotipagem
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3
Q

Quais os principios para diagnostico de doencas linfoproliferaticas na citometria de fluxo?

A

Dois principiios:

  1. Imunofenotipagem aberrante (diferente do noral)
  2. Demonstração de clonalidade
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4
Q

Como definir clonalidade da doencas linfoproliferativas T e NK?

A
  • Analise do KIR e Vbeta TCR
  • Imunofeno TRBC1
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5
Q

A identificacao de uma celula T circulante clonal significa neoplasia??

A

Nao…
Já sabemos que existe em quadros reacionais e mesmo transitorios a circulacao de celulas T clonais sem que isso signifique neoplasia

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6
Q

O que é importante estar atento na hora de identificar o linfocito na citometria?

A

Cuidado para usar apenas as Gates do SSC, FSC com o CD45 para identificar o linfocito…

Lembre que celulas anormais podem ter o CD45 diminuido ou mesmo negativo e SSC elevado devido citoplasma abundante e presenca de vacuolos e granulos… Logo podem ficar fora do local tradicional de linfocitos maduros

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7
Q

Como definir se tal marcador é positivo ou negativo na imunofeno no caso do linfoproliferativas T e NK?

A

Basicamente comparando com controle negativo utilizar o corte de 10 a 20% das células para positividade

Controle negativo para T pode ser por ex o linfocito B (usar apenas de SSC for similar de ambos)

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8
Q

Resumo da imunofenotipagem das principais doencas linfoproliferativas T?

A
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9
Q

A citometira de fluxo consegue dar o diagnóstico da leucemia LGL? Qual a imunofenotipagem típica?

A

SIm… Devido as aberrancias na IF é possível firmar o diagnóstico através desse métodos

Lembre LGL sao celulas CD8 citotoxicas ou NK

IF;
CD8+ CD4 -
TCR alfa beta +
CD57+ CD56-
CD16 +
Perda de CD5 e CD7
TCR ou KIR clonal (158e 158a e 158b)

Obs: Pode ter LGL CD4+ e duplo negativo, mas nao é a regra…

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10
Q

Explique como a Citometria pode usar a pesquisa do KIR e do Vbeta do TCR para definir clonalidade?

A

Vbeta: restricao em um antigeno (>70% da populacao) ou Vbeta negativo (entenda que o kit vem varios Ag Vbeta mas nao consegue cobrir todo o gene, logo se nao cora nada sugere clonalidade) —> clonalidade

Restricao do KIR: CD158a, 158b e 158e

Na LGL o KIR pode estar aberrantemente expresso no Linfocito T

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11
Q

COmo fazer o diagnóstico de Leucemia LGL?

A
  • IF aberrante de celulas T com expressao aberrante de Ag NK
  • TCR clonal
  • Infiltracao medular por esses linfócitos citotoxicos

Obs: Lembre de aumento de linfocitos LGL no SP, citopenias em associacao com Fenomenos Imunes.. nao esquecer da aplasia pura de celulas vermelhas

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12
Q

QUal mutacao é muito comum na Leucemia LGL e que pode auxiliar no diagnóstico (mas nao é patognomonico)?

A

STAT3
75% dos casos de leucemia LGL

POde estar presente em ate 50% dos casos de CLPD-NK

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13
Q

No caso de LGL o que é considerado expressao aberrante de marcadores NK?

A

CD57 forte e restrição de KIR pode ser CD158a, b ou e

No geral sao CD56 negativos

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14
Q

Qual apresentacao clinica do linfoma Anaplasico ?

A

Em geral Nodal por vezes extranodal

Em 30% dos casos pode envolver a MO

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15
Q

Existe alguma variante do Anaplasico que pode ter uma apresentacao clinica leucemica?

A

Sim…
Variante de pequenas celulas 5-10% dos casos

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16
Q

Como é imunofeno do linfoma anaplasico?

A

CD30+
CD2+ CD5+ CD4+ CD8-
Marcadores de citotoxidade: TIA-1, Granzima B
EMA+
ALK-1 + ou -

CD3 negativo 60%
CD7 dim ou negativo

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17
Q

Qual translocacao “tipica” do Linfoma anaplasico?

A

T(2;5)

ALK com NPM1

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18
Q

Qual cuidado se atentar para identificacao das celulas neoplasicas do linfoma anaplasico na Citometria?

A

Sao celulas grandes com alto SSC… em geral semelhantes aos monocitos ou neutrofilos

E por vezes esse linfocito neoplasico é CD3 negativo

Então muito cuidado na hora de identificar a célula neoplásica

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19
Q

Explique por que o Linfoma de Hodgkin pode ser um Diferencial para Anaplasico

A

CD30+: CUidado com Dx diferencial com LHc, pois no Hodking algumas celulas T reacionais podem complexar com as celulas de reedsternberg e na citometria aparecer como CD4+

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20
Q

É sabido que o anaplasico pode apresentar Ag mieloides como CD13 e CD15 qual diagnóstico devemos ter cuidado na hora de diferenciar casos com esses Ag positivos?

A

COm sarcoma mieloide…

Principalmente quando CD4 positivo com CD13+ e CD15+

Pode ser facilmente diagnosticado como neoplasia mieloide imatura com diferenciação monocítica (pelo alto SSC)

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21
Q

Para ajudar a pensar na Imunofeno qual celula de origem do linfoma angioimunoblastico?

A

Celua T helper folicular…

Ajuda pois em geral tera marcadores do centro germinativo como o CD10

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22
Q

Qual a grande dificuldade de diagnosticar o LInfoma angioimunoblastico?

A

Ä patologia esse linfoma é composto por destruicao arquitetural com proeminente proliferacao vascular e um infiltrado reacional MUITO pleomorfico incluindo eosinofilos, plasmocitos, linfocitos, inclusive imunoblastos EBV+

O problema é que esse infiltrado é muito PLEOMORFICO e pode inclusive conter MUITAS celulas T REACIONAIS que ficam em um numero por vezes muitooo maior que as cellulas neoplasiaacs… por vezes sendo difícil detectar na Imunofeno

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23
Q

Como fica a IF na citometria de fluxo do linfoma Angioimunoblasto?

A

CD2+
CD4+ CD8-
CD5+
CD3- ou Dim
Caracteristicamente CD10+ (Origem TFH)

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24
Q

Se CD2, CD8, CD7 podem ser expressos na celula NK que é CD3 negativo como sei que a celula neoplasica é um linfocito T com ausencia do CD3 de forma aberrante??

A

POis, em geral a célula que é CD3 negativa ela vai expressar CD4 e CD5 (nao expressos na NK)

Confirmando a origem LInfocito T

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25
Cuidado com o CD10+ no angioimunoblasto?
Lembre que nos tubos de linfoproliferativa T, muitas vezes nao é analisado o CD10… Logo ficar atento no tubo de triagem ou linfo B em que uma populacao CD10+ aparecer e nao for celula B… É uma boa dica para investigar esse diagnóstico
26
É comum o Linfoma Angioimunoblastico circular celulas no SP?
SIm 70-100% dos casos
27
Quais outros marcadores da iHQ e da citometria de fluxo podem ajudar no Diagnóstico?
BCL-6 + CXCL13 + ICOS + PD1 +
28
Tem como diferenciar pela IF ou morfologicamente as celulas da MF e SS?
Nao.. sao indistinguiveis
29
Qual a importancia de identificar as celulas da MF e SS no SP pela citometria de flluxo?
Há uma implicação prognostica clara Ex: B2 infiltracao importante do SP que coloca o pct em um estadiamento semelhante ao linfoma Nodal
30
COmo definir as celulas neoplasicas pela EORTC? E qual o grande problema dessa definicao?
CD4+ CD7- ou CD4+ CD26- O problema é que sabemos que existem linfócitos racionais que podem perder expressao do CD7 e do CD26 Pois isso a recomendacao é que seja feito todo o painel Para linfo T e analise todas as aberrancias e avalie clonalidade com PCR
31
Qual a IF clássica da MF e SS?
CD2+ CD5+ CD3+ CD4+ CD8- CD7- CD26-
32
Existe um cutoff da WHO para definir perda anormal do CD26 e CD7 nas celulas T CD4 positivas?
SIm!! Perda de 30% para o CD26 e 40% para o CD7
33
Se a perda de CD7 e CD26 pode ser encontrado em casos “normais”e racionais como proceder para Diagnóstico?
Realizar toda a investigacao para Linfo T e usar a negatividade para CD7 e CD26 para confirmacao apenas…
34
QUais os casos de MF/SS atipicos para considerar ? MAS LEMBRE SAO ATIPICOS LONGE DO COMUM
Ser CD8+ Expressar marcadores do centro germinativo de THC como CD10, BCL6, PD1, CXCL13 (fazendo diferencial com Angioimunoblastico com acometimento cutaneo
35
Clinica da leucemia prolinfocitica T?
Linfoma Agressivo Acomeitmento do SP, MO, linfonodos, figado, baco Pode acometer PELE COm morfologia típica com linfocitos com nucleolo proeminente
36
COmo é a imunofeno da Prolinfocitica T/
CD2+ CD3+ CD7+ CD4+ CD8+ (1/4 dos casos) CD52+ Aberrancia pode ser CD2 reduzido, CD3, CD5 ou CD7 pode estar aumentado ou reduzido… O que é mais típico é ser duplo positovo para CD4 e CD8 o que é incomum com outros linfomas T
37
Como confirmar o Diagnóstico da Prolinfocitica T?
PEsquisa do TCL1 (Cr14) ou MTCP1 (Cr X, gene homologo ao TCL1A/B) Gene em geral translocado nesse linfoma POde pesquisar por FISH translocacao no Cr 14 ex: t(14;14) 10% ou inv 14 - 80%
38
Qual celula neoplasica do linfoma hepato esplenico?
Linfocito T citotoxico Gamma Delta Logo vai expressar CD8+ ou dim CD4 negativo com TCR gamma delta
39
Qual o problema da identificacao dessas celulas T citotoxicas gamma delta?
Podem ser encontradas em outros linfomas (LGL gamma delta) e em qualquer outra proliferacao de celulas T gamma delta Logo analisar o quadro como um todo
40
Clinicamente como diferenciar o Hepatoesplenico da leucemia LGL?
No hepatoesplenico É uma doenca agressica com muito Sintoma B Hepatoesplenomegalia massive Em geral na IF os linfocitos sao CD4 e CD8 negativos (CD8 pode ser dim)
41
Dicas na Imunofenotipagem para diferenciar de outros linfomas citotoxicos como LGL?
Em geral apesar de ser um linfocito citotoxico gamma delta nao expressam marcadores de citotoxicidade como perforina ou granzima B Em geral possuem alteracoes citogeneticas que outros linfomas nao tem…
42
Quais alterações citogenética “tipicas” do linfoma hepatoespleniico ?
Isocromossomo 7q Trissomia do 8 ISso é muito incomum com outros linfomas especialmente outros linfomas T celulas citotoxicas
43
O que pode ajudar no diagnóstico antes mesmo de fazer a biópsia hepática no linfoma hepatoesplenico?
BMO Ë muito comum infiltracao da MO
44
Qual a relacao normal de linfocitos T alfa e beta e gamma delta? E Qual a IF normal de linfocitos Gamma delta?
>95% sao alfa/beta <5% sao gamma delta Gamma delta: CD2+, CD3+, CD5 +-, CD7+, CD4-, CD8 dim, CD57+, CD56 -, CD16+ CUidado para nao confundir neoplasia com expansao normal de linfocitos gamma delta oq pode acontecer em infeccoes, doencas autoimunes, esplenectomia…
45
O que é mais comum na IF do PTLD NOS?
Em geral CD4+ CD8 - e TCR alfa Beta CD3, CD7, CD2 e CD5 variavel… Raros casos podem ter CD8+, CD56+ e CD15 e CD30 positiovos
46
Como diferenciar o Anaplasico ALK negativo do PTCL NOS com CD30 positivo?
Anaplasito tem - morfologia tipica (hallmark cell) - CD30 forte e uniforme - EMA+ - CItotoxicidade (Granzima B, perforina..) Se tiver isso é um Anaplástico ALK negativo
47
Como diferenciar celula NK da celula T? E pq isso é dificil?
Basicamente pelo CD3 de superficie e o TCR alfa beta e gamma delta É complicado pois o linfocito ativado pode ter Cd16, CD56, CD94 E a celula NK pode ter subunidades (epsilon, zeta e gamma) do CD3
48
Basicamente quais os dois tipos de Neoplasias NK? Da para diferenciar pela imunofenotipagem?
INdolentes: CLPD-NK e enteropatia NK Agressivos: T/NK nasal, Leucemia/Linfoma NK em geral EBV driven Nao da pra diferenciar a Celula NK dessas entidades pela IF… COrrelacionar com clinica, morfologia e sitio anatomico
49
Defina CLPD-NK?
Aumento de celulas NK no SP por mais de 6 meses (>2.000 celulas NK) sem causa possivel identificada Em geral associado com neutropenia ou anemia Talvez seja uma variante da Leucemia LGL
50
Em geral na CLPD-NK como é a IF?
CD56 dim, CD16 forte, NKp46 Dim, restricao de KIR Citotoxicidade fortemente expressa Aberracao pode ser dim ou aumento de CD2, CD7, CD56 Principal aberrancia na CLPD pode ser o CD56 dim (Isso difere dos linfomas agressivos NK)
51
Como definir clonalidade?
Em geral o NK nao tem rearranjo do TCR… Da pra usar a IF na citometria de fluxo para o receptor KIR Restricao de CD158a, CD158b, CD158e Se ausencia de KIR tb é considerado anormal
52
Alem desses metodos como diagnosticar clonalidade baseado na IF?
Expressao forte do CD94 e HLA-DR se correlacionam com clonalidade na CLPD-NK
53
Clinica do Linfoma T/NK nasal? IF?
Em geral cursa com necrose importante angiocentrica principalmente de vias aereas superiores… Em geral poucas celulas cirulantes.. IF qnd utilizada pouco caracteristica… CD56 forte, CD16 dim ou - sCD3- Classicamente EBV positivo In situ Hybridization Pode ser positivo para CD38 (potencial de uso de daratummomab)
54
Como diferenciar Linfoma NK agressivo de um Indolente?
Primeiro pela clínica e segundo pelo EBV (Positivo Nos casos agressivos)
55
Da pra diferenciar Linfoma agressivo T/NK nasal da leucemia/ Linfoma NK agressivo?
Nao… Distincao clinica, pois imunofeno igual TB positivo para EBV
56
NK cell enteropathy?
Possivel condicao nao neoplasica Ocorre em qualquer lugar do TGI com ulceracoes superficieiais INfiltrado com celulas NK com CD56 forte CD3 negativo e EBV negativo
57
NK cell enteropathy?
Possivel condicao nao neoplasica Ocorre em qualquer lugar do TGI com ulceracoes superficieiais INfiltrado com celulas NK com CD56 forte CD3 negativo e EBV negativo
58
Quias os principais diagnosticos para diferenciar do Enteropatia NK?
- MEITL (Monomorphic epitheliotropic intestinal T cell Lymphoma) -> Rearranjo do TCR, epidermotropismo, infiltrado monomorfico - Linfoma T/NK extranodal Classicamente NK cell enteropatgy não tem epidermotropismo
59
Explique O por que o TRBC1 é um bom método para analisar Clonalidade de células T?
Pois o T-cell receptor B chain constant region (TRBC) existe em apenas duas isoformas TRBC1 e TRBC2… Logo uso de um deles é otimo para avaliar clonalidade do TCR alfa beta
60
O TRBC1 serve para o TCR gamma delta?
Nao.. Gamma delta é negativo para TCRBC1 e TCRB2
61
Qual populacao de celulas T é importante ficar de olho ao usar o TRBC1 que pode nao ser util e ser negativo?
Justamente celulas CD8+ ou dupla negativos CD4-CD8- POis é o mais comum de linfocitos gamma delta
62
Explique o motivo de usar o TRBC1 junto com outros marcadores de celullas T e marcadores do TCR?
POis, é importante identificar celulas T com TCR alfa e beta para analise… Excluindo celulas T com TCR gamma delta
63
Qual o valor do TRBC1 para definir clonalidade?
15%/85% —> Definir restrição do TRBC1
64
E se o TRBC1 vem Dim (fica entre o positivo e o negativo) da pra considerar clonalidade?
Se as celulas Dim no TRBC1 nas outras gates forem as celulas anormais E se > 50% das células cairem nessa gate Dim do TRBC1 podemos considerar como clonal…
65
E se o TRBC1 for Dim, mas sem outros marcadores anormais?
Provavelmente deve ser TRBC2 positivo
66
O TRBC1 e CD3 fazem parte do TCR alfa beta?
SIM…
67
Se o TRBC1 e CD3 sao parte do TCR alfa e beta se a neoplasia T perde o CD3 é possível analisar e avaliar a clonalidade pelo TRBC1?
Não… Alguns casos parece ser possível usar o TRBC1 citoplasmático em células que tem o CD3 citoplasmático apenas…
68
O que é um T-CUS?
T-Cell clones of uncertain significance
69
T-CUs explique?
EM geral sao celulas T clonais que em geral auemntam com idade, condicoes inflamatorias, mas que nem smp estao relacionadas com uma neoplasia T ou qualquer outra condicao… No geral Sao CD8+ ou duplo positivas CD4+CD8+
70
COmo suspeitar de neoplasia no paciente com T-CUS?
CD4+ Lembre que se for CD4+ suspeita de neoplasia T aumenta… T-CUS é CD8+ ou duplo positiva

Citometria De Fluxo (8 decks)

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