Grupp 9 - Digital Droplet PCR

Question 1

Vad är digital PCR?

Answer 1

En kvantitativ PCR-teknik som ger ett känsligt och effektivt sätt för mätning av mängden DNA eller RNA som finns i ett prov

Question 2

Hur delas provblandningen upp? Hur kvantifieras proverna?

Answer 2

Den delas i ett stort antal enskilda brunnar innan amplifieringen vilket visar om målsekvensen är närvarande i varje brunn eller inte.

Baserat på närvaro/frånvaro av fluorescens i den amplifierade reaktionsbrunnen beräknas det absoluta antalet av målsekvensen som fanns i originalprovet

Question 3

Hur sker droplet digital PCR? När görs det?

Answer 3

metoden utnyttjar små droppar för att separera provmaterialet i mindre delar innan amplifieringen.

Det görs tex när man har för mycket genetiskt material i provet och behöver separera det

Question 4

Hur generar man dropparna?

Answer 4

En droppgenerator använder specialreagenser och mikrofluidik för att fördela upp provet i droppar på nanoliterstorlek.

Mål- och bakgrunds-DNA fördelas slumpmässigt i dropparna under uppdelningen

Question 5

Vilka användningsområden finns för ddPCR?

Answer 5

• Kvantifiering av genuttryck
• Detektion av sällsynta mutationer
• Genomiska förändringar
• Single cell analysis
• Cancerforskning

Question 6

Fördelar/nackdelar med ddPCR?

Answer 6

\+ Behöver inte standard
\+ Precision
\+ Reproducerbarhet
\+ Känslighet
\+ Flexibilitet
\+ Kompatibilitet

• Dyra instrument och reagens