Grupp 1 - Karyotypning + fish Flashcards
Vad är syftet med karyotypning?
Det är en odlingsbaserad metod för att bedöma antalet kromosomer, deras storlek, bandmönster samt centromerposition. Den möjliggör detektion av kromosomala abnormaliteter
Vad för typ av prov tas från patienten vid karyotypning?
Nästan vilken cell eller vävnad som helst tex blod, prov från fostervatten eller placenta
Hur används tumörceller vid karyotypning?
Tumörcellernas genom extraheras och används för att hitta behandling som är riktad mot specifika tumörgener
Vilken fas av mitosen måste cellerna finnas i för karyotypning?
Metafas
Hur kan man styra cellernas delning samt vilken fas de är i?
Mitotiska stimulatorer (mitogener) används för att aktivera celldelning, tex fytohemagluttininer
Mitotiska hämmare används för att fixera cellerna i metafas, tex kolchicin.
Hur fungerar mitotiska hämmare?
De blockerar syntesen av mikrotubuli (som annars drar isär systerkromatiderna) och stör dess aktivitet.
Vilka kriterier undersöks vid karyotypning?
- Antal kromosomer
- Storlek
- Bandmönster
- Storleken och positionen av giemsabanden
- Var centromeren sitter (meta-, submeta-, acro- eller telocentriskt)
Vilka av följande centromerpositioner är normala?
- Metacentrisk
- Submetacentrisk
- Acrocentrisk
- Telocentrisk
Normala:
- Metacentrisk
- Submetacentrisk
- Acrocentrisk
Telocentrisk kan indikera mutation. Centromeren sitter i ena änden så att den inte har någon p-arm.
Vad är bandmönster?
Ljusa och mörka tvärgående band som kan ses på kromosomer med karyotypning. Banden uppstår efter färgning
Vilka 4 bandfärgningar finns och vad visar de?
1) G-bandning. Vanligast. Ger mörka+ljusa band, där mörka visar heterokromatin+AT-rika sekvenser och ljusa visar eukromatin+GC-rika delar
2) R-bandning. Färgerna byter håll - AT=ljus, GC=mörk.
3) Q-bandning. Använder fluorescens-färg som binder till AT-rika regioner
4) C-bandning: färgar in centromererna
Vad står FISH för?
Fluorescence in situ hybridization
Vad är grundprincipen för FISH?
Fluorescerande prober binder till specifika delar av kromosomer/hela kromosomer och kan studeras via fluorescensmikroskop
Hur skiljer sig FISH från karyotypning?
- Karyotypning ger översikt och är bra för att studera hela genomet
- FISH är mer känslig, detaljerad och snabb
- FISH använder fluorescens
- FISH: Ingen odling behövs
- FISH: Kromosomer både i metafas och interfas kan studeras - inte bara delande celler
Hur skiljer sig direkt FISH från indirekt?
Direkt: reportermolekylen (enzym, fluorescensmarkör, radioisotop) är direkt kopplad till proben och avger fluorescens vid mikroskopering
Indirekt: En fluoroforinmärkt antikropp behövs som binder in till proben. Proben är inte fluorescent.
Beskriv SKY FISH
SKY=Spectral Karyotyp
Flera olika fluorescensfärger används vilket ger en karyotyp som visar kromosompar i olika distinkta mönster. Gör det lättare att bestämma var kromosomavvikelser finns.
